[发明专利]草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种草鱼呼肠孤病毒II型巢式RT-PCR引物组，其特征在于，所述RT-PCR引物组的核苷酸序列为：

GCRV-II Nest-SP：5'-CGCGATTTCATACCCTTTCT-3'；

GCRV-II Nest-OutP：5'-TAGCTGCCGTACTTGGGATGA-3'；

GCRV-II Nest-InP：5'-CATACGATCGCTCCCAACTCC-3'。

2.一种用于检测草鱼呼肠孤病毒II型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的RT-PCR引物组、cDNA模板和RT-PCR反应试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品；所述阳性对照品为草鱼呼肠孤病毒II型HZ08株cDNA。

4.权利要求1所述RT-PCR引物组在制备草鱼呼肠孤病毒II型检测试剂中的应用；

所述草鱼呼肠孤病毒II型检测试剂的使用方法，包括以下步骤：

(1)提取待测样品中的RNA，逆转录合成cDNA模板；

(2)使用GCRV-II Nest-SP和GCRV-II Nest-OutP对步骤(1)所得cDNA模板进行RT-PCR扩增，得到扩增产物A；

(3)使用GCRV-II Nest-SP和GCRV-II Nest-InP对步骤(2)所得扩增产物A进行RT-PCR扩增，得到扩增产物B；

(4)对比扩增产物B和阳性对照品，判断待测样品中是否含有草鱼呼肠孤病毒II型；

步骤(2)中的RT-PCR扩增体系为：

步骤(2)中的RT-PCR扩增条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次；72℃终延伸10min；

步骤(3)中的RT-PCR扩增体系为：

步骤(3)中的RT-PCR扩增条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次；72℃终延伸10min。