[发明专利]检测人血清淀粉样蛋白A的试剂及其制备方法

权利要求书

1.检测人血清淀粉样蛋白A的检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和标准品：

所述试剂R1的pH值为6.5～8.0，包括缓冲溶液、稳定剂和防腐剂；

所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲液中至少一种；所述稳定剂选自蛋白质、无机盐、金属络合剂、表面活性剂、助悬剂中至少一种；所述防腐剂选自Proclin-200、Proclin-300和NaN₃；

所述试剂R2由如下原料制得：85nm胶乳颗粒、280nm胶乳颗粒、EDC、抗人血清淀粉样蛋白A、磷酸盐缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、BSA和保存液；

所述保存液包括：HEPES缓冲液、BSA、蔗糖和Proclin-300。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂R1包括：30～100mmol/L磷酸盐缓冲液、1g/L～10g/L BSA、0.1g/L～2g/L Tween20和0.1g/L Proclin-300。

3.权利要求1所述的检测试剂中试剂R2的制备方法，其特征在于，包括：

将抗人血清淀粉样蛋白A以磷酸盐缓冲液溶解，获得抗人血清淀粉样蛋白A溶液；将牛血清白蛋白以MOPS缓冲液溶解，获得牛血清白蛋白溶液；

将85nm羧基化聚苯乙烯微球以MES缓冲液稀释，加入EDC活化后，与抗人血清淀粉样蛋白A溶液混合反应，再次以EDC活化后加入牛血清白蛋白溶液封闭，离心收集沉淀以保存液悬浮，获得A液；

将280nm羧基化聚苯乙烯微球以MES缓冲液稀释，加入EDC活化后，与抗人血清淀粉样蛋白A溶液混合反应，再次以EDC活化后加入牛血清白蛋白溶液封闭，离心收集沉淀以保存液悬浮，获得B液；

将所述A液与所述B液混合，42℃老化15～20h，分散制得试剂R2。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.8；所述抗人血清淀粉样蛋白A溶液中，抗人血清淀粉样蛋白A的浓度为0.43mg/ml；所述MOPS缓冲液的pH值为7.0；所述牛血清白蛋白溶液中，牛血清白蛋白的浓度为0.14～0.43mg/ml。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

所述MES缓冲液的浓度为10mmol/L；

制备所述A液的步骤中，所述85nm胶乳颗粒以MES缓冲液稀释至浓度为1g/L；

制备所述B液的步骤中，所述280nm胶乳颗粒以MES缓冲液稀释至浓度为1g/L。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述加入EDC为加入含有EDC的MES缓冲液，其中，EDC浓度为4mg/mL或2.3mg/mL，MES的浓度为10mmol/L；所述制备A液的步骤中加入EDC至浓度为4mg/ml；所述制备B液的步骤中加入EDC至浓度为2.3mg/ml；所述活化的条件为室温活化30min。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备A液的步骤中与抗人血清淀粉样蛋白A溶液混合至抗人血清淀粉样蛋白A溶液的浓度为4mg/ml；所述制备B液的步骤中与抗原稀释液混合至抗原稀释液的浓度为2.3mg/ml；所述与抗原稀释液混合反应的条件为室温反应4～6h。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备A液的步骤中加入BSA至其浓度为30μg/ml；所述制备B液的步骤中加入BSA至其浓度为30μg/ml，所述封闭的反应条件为室温反应20～40min。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述A液与所述B液混合至胶乳颗粒的密度为0.5mg/mL。

10.根据权利要求3～9任一项所示的制备方法，其特征在于，所述试剂R2中，中85nm微球与280nm微球的质量比为1.4:1。