[发明专利]检测人血清淀粉样蛋白A的试剂及其制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及检测人血清淀粉样蛋白A的试剂及其制备方法。本发明提供的检测试剂中包括试剂R1、试剂R2和标准品，其中试剂R1采用的稳定剂和缓冲液组分合理，试剂R2采用两种粒径的乳胶颗粒，粒径选择合理，且制备方案提高了抗体偶联的效率。该试剂在保证低值精密度和准确度的前提下，提高了试剂的线性，相对于现有技术，将线性范围扩大至500mg/L的被测物，且检测10mg/L附近病人样本精密度CV为1.26％，整个检测过程仅需10min。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及检测人血清淀粉样蛋白A的试剂及其制备方法。

背景技术

感染性疾病是临床常见的疾病类型，严重影响人类健康，是目前主要的公共卫生问题。世界卫生组织(WHO)调查表明，全球每年约有1500万人死于感染，约占全球总死亡的26％。多数感染者若被及时正确的诊断及用药，可在短时期内治愈。其中细菌和病毒感染是最常见的感染性疾病，感染后机体症状、体征多不特异仅靠临床症状体征鉴别细菌和病毒比较困难，同时两者在临床上用药也存在很大差异，因此早期区分细菌和病毒感染可为临床医生用药提供有意义的参考。

血清淀粉样蛋白A(SAA)是由肝脏分泌一种非特异性急性相时反应蛋白，正常情况下SAA含量极低，但在炎症和细菌、病毒感染等病原体刺激下，初期迅速升高可至原来的1000倍，并在疾病恢复期迅速下降，近年来受到人们广泛的关注。正常与临床上常用的炎症标志物C-反应蛋白(CRP)相比最大不同是，在受到病毒感染时，SAA会迅速升高，而CRP在受到无细菌感染的病毒感染时不升高或者升高幅度较低；而受到细菌及其他疾病感染时SAA与CRP敏感性相似。因此SAA与CRP联合检测可在早期迅速诊断出感染是否由病毒引起。除此之外，根据SAA特点，SAA水平变化对于治疗效果及预后评价均有非常重要的临床价值。

临床对血清淀粉样蛋白A的检测方法主要有放射性免疫检测法、免疫散射比浊法、酶联免疫吸附法、免疫层洗法和胶乳增强免疫比浊发等。其中放射性免疫检测法具有灵敏度高特异性强等优点，但反射性元素的效期较短，后期废弃物难以处理，逐渐被市场淘汰；酶联免疫吸附法操作繁琐，自动化水平低也逐渐被取代。胶乳增强免疫比浊发是一种较稳定的均相免疫比浊法，将抗体连接在胶乳微球上，抗原与交联微球的抗体结合后，会产生聚集从而影响吸光度的变化，吸光度变化与被测物的相关性在一定范围内可反应被测物的浓度。且生化试剂能够在全自动生化仪上快速高通量检测的优点，可满足临床使用的要求。

由于SAA正常范围低于10mg/L，病毒感染时可到正常范围的10～1000倍，而现有的胶乳免疫比浊法检测血清淀粉样蛋白A技术中，SAA线性较难达到临床检测的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供人血清淀粉样蛋白A的试剂及其制备方法，使检测的线性和精密度得到提高。

本发明提供的检测人血清淀粉样蛋白A的检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和标准品：

所述试剂R1的pH值为6.5～8.0，包括缓冲溶液、稳定剂和防腐剂；

所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲液中至少一种；所述稳定剂选自蛋白质、无机盐、金属络合剂、表面活性剂、助悬剂中至少一种；所述防腐剂选自Proclin-200、Proclin-300和NaN₃；

所述试剂R2由如下原料制得：85nm胶乳颗粒、280nm胶乳颗粒、EDC、抗人血清淀粉样蛋白A、磷酸盐缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、BSA和保存液；

所述保存液包括：HEPES缓冲液、BSA、蔗糖和Proclin-300。

所述保存液的pH值为7.8，由如下组分组成：50mmol/L的HEPES缓冲液，50g/L蔗糖，4g/L牛血清白蛋白和0.1g/LProclin-300。