[发明专利]一种免疫调节功能预授权型间充质干细胞、制备方法及注射液

说明书

本发明涉及一种免疫调节功能预授权型间充质干细胞，所述间充质干细胞为预先经过γ‑干扰素IINF‑γ联合肿瘤坏死因子TNF‑α激活的免疫功能预授权型间充质干细胞。本发明首次应用炎症因子γ‑干扰素和肿瘤坏死因子与间充质干细胞MSCs进行预先共培养，经过该共培养过程，启动/激活了MSCs的免疫调节执行能力，使MSCs预先获得了一致性的免疫调节功能，进入体内后便可快速及时地行使免疫功能调节,克服了当前MSCs所共同存在的由于未授权免疫调节功能而导致的治疗效果差的缺点，同时还避免了由于患者个体炎症差异的微环境所导致的MSCs免疫调节功能不一致的缺陷。优选地，所述间充质干细胞为脐带华通胶间充质干细胞WJMSCs。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种免疫预授权型、可立即一致性行使免疫功能调节的间充质干细胞(MSCs)、其制备方法和含有该间充质干细胞的注射液。

背景技术

免疫系统是机体的防御体系，一旦异体物质，如细菌病毒和各种异性蛋白侵入危害机体，免疫细胞就会将它们包围、分解、吞噬予以消灭和清除，免疫球蛋白就会大量制造变成抗体对抗入侵者。然而，免疫系统的这种防御功能是处于微妙的动态平衡调节状态，抵御外来入侵，同时识别自身组织，保护机体组织细胞。一旦打破这种平衡，产生对自身组织产生免疫应答反应，或对外来抗原产生过度免疫反应，即可导致临床常见的多种免疫炎性疾病，如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、免疫炎性动脉粥样硬化、免疫性心肌病及肾脏、肝脏病等等。

然而遗憾的是，当前针对发病率、致残率、死亡率日益增加的免疫相关性炎性疾病的治疗尚缺乏安全有效的治疗手段和药物。类固醇类激素及免疫抑制剂虽可部分缓解病情，但长期应用面临感染、肿瘤发生率增加等不良反应。因此，面对自身免疫炎症相关疾病的治疗现状，急需寻找一种替代治疗方案。

近年来，大量研究发现，来自中胚层的间充质干细胞MSCs(Mesnchymal StemCells)有免疫调节功能。在MSCs治疗对类固醇耐药的55例急性移植物抗宿主病(acuteGvHD)患者的2期临床研究发现，2年缓解率达52％，对照组仅10％。然而，在接下来240例相同入选患者的MSCs治疗的3期临床研究中，却发现无疗效差异。同时，国际上针对多种自家免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、溃疡性结肠炎等，应用MSCs治疗的1-2期临床硏究结果也显示了不一致的效果报道。为此，引起了医学界对MSCs免疫调节治疗前景的广泛争议与质疑。

最近对MSCs生物学功能的硏究发现，出现上述MSCs免疫调节治疗效果不一致的根本原因是MSCs内在的特殊生物学功能所决定的。硏究发现，MSCs的免疫调节功能不是MSCs本身结构所具有的，而是炎症微环境所赋予MSCs的免疫调节执行“权力”，即生物学上的免疫激活。外源过继输入的MSCs要在体内特有的炎症环境下，即炎症因子作用下能使MSCs具有免疫功能调节能力。激活的MSCs才能通过旁/自分泌功能产生免疫调节因子，及对免疫细胞产生接触调控与抑制，达到有效治疗免疫相关疾病，使其恢复免疫平衡、修复损伤组织、重塑细胞赖以生存的内环境的效果。

然而长期以来，由于忽视了对MSCs这一生物学特性及决定其免疫调节功能关键因素的认识，并忽视了对患者的各种免疫炎症相关疾病体内炎症微环境动态变化的认识，而采用了相同细胞、相同剂量、相同单一方法过继治疗，结果导致了治疗失败，以及临床研究产生不一致的治疗效果。

发明内容

(一)要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种免疫调节功能预授权型间充质干细胞的制备方法，将分离提取的脐带华通胶间充质干细胞(WJMSCs)或其他来源的间充质干细胞MSCs预先与炎性因子γ-干扰素(INF-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-a)共培养，制备免疫调节功能预授权型PL-MSCs(Pre-licensing MSCs)，再进一步低氧培养加强其免疫调节功能，得到用于制备药物的免疫活性PL-MSCs，该免疫活性PL-MSCs可现用或低温储存以用于制备注射液等药物产品。