[发明专利]一种玉龙蕨的组织培养方法

说明书

本发明公开了一种玉龙蕨的组织培养方法，包括以下步骤：(1)玉龙蕨孢子萌发；取玉龙蕨孢子接种在萌发培养基中进行培养萌发，得到丛状的配子体；(2)诱导成苗；将所述配子体接种于诱导培养基中培养，得到孢子体；(3)增殖；将所述孢子体接种于继代培养基中培养，得到丛生苗；(4)壮苗；将所述丛生苗接种于1/2MS培养基中进行培养，得到无根苗；(5)移栽炼苗；将所述无根苗进行移栽、炼苗，即得。本发明的优点是：成功构建了玉龙蕨的种苗高效繁殖体系，实现了玉龙蕨的人工快繁，为其保护和开发利用提供了技术支撑。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，特别涉及一种玉龙蕨的组织培养方法。

背景技术

玉龙蕨(Polystichum glaciale Christ)为鳞毛蕨科耳蕨属的多年生小型草本蕨类植物，是我国特有的高寒物种。玉龙蕨数量稀少，濒临灭绝，被列为国家Ⅰ级重点保护植物，极小种群植物，同时被列入《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》(IUCN)近危(NT)级别植物。王龙蕨仅分布在云南、四川、西藏等地，生于海拔3200-4700米的高山冰川穴洞、峭壁及岩石缝中。玉龙蕨的鳞片初为红棕色，老时变为苍白色。玉龙蕨株型秀丽，可做为高原地区小盆景或装饰石山的微景观植物进行开发，具有较好的观赏价值，但由于生境特殊，传统繁殖方式也较为困难，使其尚未能被开发利用。

此外，对于濒危植物进行有效保护和开发利用，行之有效的办法就是建立其高效的繁殖技术体系。植物组织培养技术所需材料少，对植株的正常生长影响极小，是当前常用的繁殖方法。为了更好地保护玉龙蕨，以及后续的开发利用，首要关键任务就是解决其繁殖困难的问题，当前未见玉龙蕨的繁殖报道。因此，采用现代植物组织培养技术，建立玉龙蕨的种苗高效繁殖体系，对于玉龙蕨的保护、科学研究，以及开发利用均具有重要的意义。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种玉龙蕨的组织培养方法。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种玉龙蕨的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)玉龙蕨孢子萌发；取玉龙蕨孢子接种在萌发培养基中进行培养萌发，得到丛状的配子体；

(2)诱导成苗；将所述配子体接种于诱导培养基中培养，得到孢子体；

(3)增殖；将所述孢子体接种于继代培养基中培养，得到丛生苗；

(4)壮苗；将所述丛生苗接种于1/2MS培养基中进行培养，得到无根苗；

(5)移栽炼苗；将所述无根苗进行移栽、炼苗，即得。

优选的，所述步骤(1)中玉龙蕨孢子在接种前还包括消毒的步骤；所述消毒采用质量浓度为0.1％的升汞溶液来进行，消毒的时间为4～7分钟。

特别优选的，所述消毒的时间为5～6分钟。

优选的，所述步骤(1)中培养萌发的温度为5℃～25℃，培养萌发的光照强度为1500～2000Lx，培养萌发的光照时间为8～14小时/天。

特别优选的，所述培养萌发的温度为15℃～20℃。

优选的，所述步骤(1)中萌发培养基采用MS培养基、1/2MS培养基、1/4MS培养基或1/8MS培养基中的一种。

优选的，所述步骤(2)中诱导培养基为1/2MS培养基。

优选的，所述步骤(3)中继代培养基为1/2MS培养基。

优选的，所述步骤(5)中在移栽前，无根苗先置于室内自然光条件下闭瓶炼苗；移栽时将无根苗基部的培养基清洗干净，并将基部以上40％～50％的叶片去除，多菌灵消毒；移栽时采用包括泥炭藓和河沙的基质来进行。