[发明专利]一种共表达L-苏氨酸醛缩酶与PLP合酶的工程菌及应用

权利要求书

1.一种L-syn-对甲砜基苯丝氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）培养共表达L-苏氨酸醛缩酶与PLP合酶的工程菌，收集菌体、破碎制备粗酶液；

（2）使用交联剂预处理的固定化材料对预混液进行固定化，制得L-苏氨酸醛缩酶与辅酶PLP的共固定化酶；

（3）使用所述共固定化酶作为催化剂，以对甲砜基苯甲醛和甘氨酸为底物进行催化反应，制备L-syn-对甲砜基苯丝氨酸；

所述共表达L-苏氨酸醛缩酶与PLP合酶的工程菌为在表达菌株中转入L-苏氨酸醛缩酶基因和PLP合酶基因而得；L-苏氨酸醛缩酶基因的序列如SEQ ID No.1所示；PLP合酶基因的序列如SEQ ID No.4所示；所述表达菌株为大肠杆菌，将L-苏氨酸醛缩酶基因和PLP合酶基因构建在同一质粒上或者两个不同质粒上，在大肠杆菌中进行共表达；当L-苏氨酸醛缩酶基因和PLP合酶基因构建在同一质粒上时，使用的质粒载体为pRSF-Duet-1；当构建在两个不同质粒上时，L-苏氨酸醛缩酶基因构建在质粒pRSF-Duet-1上，而PLP合酶基因构建在pET-23a上；

步骤（3）中催化反应的反应体系如下：1 L 100 mM pH 8 的NaOH-Gly缓冲液中溶解0.1M对甲砜基苯甲醛、1 M甘氨酸，25 g共固定化酶，30℃，磁力搅拌，反应1-3 h；

步骤（2）中固定化时使用的固定化载体为氨基树脂，交联剂为乙醇胺；

固定化载体使用前进行预处理，预处理方法如下：

（a）将氨基树脂用蒸馏水浸泡3个小时并不断搅拌，重复3次，然后减压过滤取滤饼；

（b）氨基树脂用0.4%的戊二醛浸泡3小时并不断搅拌，然后减压过滤取滤饼，并用蒸馏水清洗3次；

（c）将清洗后的氨基树脂使用0.5%乙醇胺碳酸氢钙溶液浸泡3个小时进行包裹交联，温度为20℃-40℃，搅拌转速为100rpm-200rpm，然后减压过滤取滤饼，并用蒸馏水清洗3次。