[发明专利]一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法

权利要求书

1.一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：包括将消毒灭菌处理后的叶片外植体经愈伤组织诱导、丛生芽发生同步诱导；丛生芽增殖；不定根诱导；驯化移栽；具体步骤为：

(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其当年生叶片；

(2)将1步骤的叶片进行消毒处理；

(3)愈伤组织诱导和丛生芽发生培养：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片接入下列培养基A中，所述A培养基包括以下原料：

MS培养液

6-苄胺基嘌呤6-BA

萘乙酸NAA

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织诱导和丛生芽发生；

(4)丛生芽增殖培养：将步骤3中培养的丛生芽转入新鲜的培养基A中，控制光照度、温度、光照时间的条件下进行丛生芽增殖培养；

(5)取4步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基B中，所述B培养基包括以下原料：

1/2MS培养液

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下获得苗壮根粗的生根苗；

(6)炼苗和移栽。

2.根据权利要求1所述的一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：所述步骤2中所述叶片进行消毒处理的方法为：流水洗净后用质量比为10％洗衣粉溶液浸泡5min，流水冲洗10h后置于超净工作台中；用体积比75％乙醇溶液浸泡3-5s，然后用质量比为0.1％的升汞水溶液消毒5min，期间不断摇晃瓶身以达到最佳灭菌效果，最后无菌水冲洗5次，每次不低于3min，置于滤纸上吸干残留无菌水，最终得到消毒灭菌处理的外植体。

3.根据权利要求1所述的一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：所述步骤3中所述A培养基的组成为：

4.根据权利要求1所述的一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：所述步骤3中A培养基的pH值为5.6-5.8。

5.根据权利要求1所述的一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：所述步骤5中所述B培养基的组成为：

1/2MS培养液

蔗糖 15000mg/L

琼脂粉 4800mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：所述步骤5中B培养基的pH值为5.6-5.8。

7.根据权利要求1所述的一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，其特征在于：所述步骤6中炼苗和移栽的方法如下：取5步骤的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗3d，打开瓶盖露苗2d，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中浸泡3-5min后，移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，即得移栽苗。