[发明专利]一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法

说明书

本发明提供一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，该方法包括将消毒灭菌处理后的滇北球花报春叶片外植体接种于培养基A中培养，在光照度1800‑2300lx，光照时间8h/d，温度控制在20±1℃的条件下进行愈伤组织诱导和丛芽发生培养；30d后将诱导出的丛生芽转于于新鲜的A培养基中培养，30d后不定芽增殖系数达20.00左右。待增殖丛生芽高5‑8cm时，单苗接入培养基B中培养25‑30d后获得苗壮根粗的生根苗，然后将该生根苗移栽。本发明成本低、周期短、试管苗质量和成活率高，为保护野生资源、优质种苗繁育提供了技术支撑，可在短时间内生产基因型背景一致的优良种苗。

技术领域

本发明涉及中草药繁殖技术领域，特别涉及一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法。

背景技术

滇北球花报春Primuladenticulata为报春花科Primulaceae报春花属Primula多年生草本，本亚种为球花报春伸展至我国云南、四川、贵州以及缅甸北部的一个类型，虽与原亚种无可截然分开的性状，但花葶通常较粗壮，长达叶丛的6倍以上，花冠亦稍大，分布区与原亚种不连接。花期3-4月，果期4月。产于云南(腾冲、龙陵、永平、马关、大理、丽江、双柏、易门、昆明)，四川西部(石棉、普格、庐定)和贵州(贵阳、水城、雷山)等地。生于山坡草地和灌丛中，海拔1500-3000米。

滇北球花报春为野洋参的基原植物，又名米伞花《贵州民间药物》、报春花《云南中草药》，以滇北球花报春根入药，具有补虚，消疳，通乳的功效。主治虚劳咳嗽，病后体虚，小儿疳积，乳汁不下等症；在《生草药性备要》、《贵州草药》《、全国中草药汇编》中均指出其具有行气血、消肿毒、止痛功效，主治胃痛、腹痛、痛风、骨折、跌打损伤、痈疖肿痛、皮肤溃疡等症。

近年来，随着人们对它的需求，加上野外生境的破坏，滇北球花报春资源锐减，严重限制了对其研究开发工作的进行。滇北球花报春通常以其种子为繁殖单位。但种子萌发率低，实生苗生长缓慢且生物量较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植和高药效品种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来的高效人工繁殖方法来扩大滇北球花报春种苗的繁殖量，进行其高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，可以有效解决滇北球花报春以其种子为繁殖单位，存在萌发率低，实生苗生长缓慢且生物里较小、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植，高药效品种难以大面积推广的问题。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种滇北球花报春人工高效繁殖的方法，包括将消毒灭菌处理后的叶片外植体经愈伤组织诱导、丛生芽发生同步诱导；丛生芽增殖；不定根诱导；驯化移栽；具体步骤为：

(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其当年生叶片；

(2)将1步骤的叶片进行消毒处理；

(3)愈伤组织诱导和丛生芽发生培养：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片接入下列培养基A中，所述A培养基包括以下原料：

MS培养液

6-苄胺基嘌呤6-BA

萘乙酸NAA

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织诱导和丛生芽发生；

(4)丛生芽增殖培养：将步骤3中培养的丛生芽转入新鲜的培养基A中，控制光照度、温度、光照时间的条件下进行丛生芽增殖培养；

(5)取4步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基B中，所述B培养基包括以下原料：