[发明专利]新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒

说明书

本发明提供一种新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒，其中包括：包被有生物素‑链霉亲和素标记的人ACE2蛋白的酶标板、辣根过氧化酶标记的新型冠状病毒RBD蛋白、新型冠状病毒中和性抗体阳性对照、包被液、洗涤液、稀释液、封闭液、显色液和终止液等。该试剂盒具有成本低，操作简单，高灵敏度、高特异性、高准确度的特点，可用于新型冠状病毒中和抗体的批量、快速检测。

技术领域

本发明涉及免疫检验技术领域，具体地说，涉及一种新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒SARS-CoV-2 (即2019-nCoV)是2019年新发现的一种病毒，可导致人类病毒性肺炎或肺部感染。冠状病毒基因组依次编码为棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白。其中棘突蛋白是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，含有两个亚基，S1亚基与S2亚基。其中S1主要包含有受体结合区（receptorbinding domain， RBD），负责识别细胞的受体。SARS-CoV-2的刺突蛋白与人血管紧张素转化酶2（Angiotensin-converting enzyme 2，ACE2）蛋白互作来感染人的呼吸道上皮细胞。棘突蛋白负责新冠病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合，是新冠中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。

新冠中和性抗体，可以阻断病毒刺突蛋白与人ACE2蛋白的结合，从而阻止病毒侵染人的呼吸道上皮细胞。在实际研发过程中，需要筛选具有中和能力的抗体，以达到治疗的目的。另外，新冠疫苗研制中也必须以能够成功诱导中和抗体（保护性抗体）作为有效预防新冠感染的前提。因此，亟需开发有效且便捷的方法来检测新冠病毒中和抗体。

目前检测新型冠状病毒中和抗体的方法主要为活病毒或假病毒中和试验。由于复杂的细胞实验过程，并受限于安全与试剂耗材等因素，现有方法不适合高通量大规模的新冠病毒中和抗体筛选工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有成本低，操作简单，高灵敏度、高特异性、高准确度的酶联免疫吸附（ELISA）检测试剂盒，用于新型冠状病毒中和抗体的批量、快速检测。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒，所述试剂盒包括：包被有链霉亲和素和生物素标记的人ACE2蛋白的酶标板、辣根过氧化酶标记的新型冠状病毒RBD蛋白、新型冠状病毒中和性抗体阳性对照（即新冠病毒中和抗体参考品）、包被液、洗涤液、稀释液、封闭液、显色液和终止液等。

优选地，酶标板上包被的链霉亲和素的浓度为5ug/mL，生物素标记的人ACE2蛋白的浓度为2ug/mL，链霉亲和素与生物素标记的人ACE2蛋白的摩尔比为1:4。

包被方法如下：酶标板先经过链霉亲和素(streptavidin，缩写SA)溶液包被过夜，用洗涤液洗板后，加入生物素标记的人ACE2蛋白，用封闭液进行封闭并洗涤后密封保存。

优选地，所述辣根过氧化酶标记的新型冠状病毒RBD蛋白中，辣根过氧化酶与RBD蛋白的摩尔比为4:1。

辣根过氧化酶标记的新型冠状病毒RBD蛋白的使用浓度为50ng/mL。

本发明中，不局限于使用辣根过氧化酶（HRP）标记新冠病毒刺突蛋白RBD，还可以用FITC、PE等标记RBD蛋白。

本发明中，所述新型冠状病毒中和性抗体阳性对照来自于新冠康复患者，测定其可变区序列并通过重组形成的，该阳性对照购自上海祥耀生物科技有限公司。

优选地，所述包被液为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，具体成分为：15 mM Na₂CO₃，35 mMNaHCO₃，pH 9.6。

优选地，所述洗涤液为：20mM Tris，150mM NaCl，0.5% v/v Tween-20，pH7.4。