[发明专利]基于DNA walker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合和方法

权利要求书

1.基于DNA walker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合，包括DNA步行者探针、轨道分子、保护序列、序列1和序列2；

所述DNA步行者探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述轨道分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述保护序列的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述序列1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述序列2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.一种非诊断目的地基于权利要求1所述的序列组合检测EB病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将所述DNA步行者探针和保护序列在95℃下处理5min、冷却，得到互补序列；

2)将所述轨道分子在95℃下处理5min、冷却，得到发夹结构；

3)将所述步骤1)得到的互补序列和步骤2)得到的发夹结构固定在微球上、封闭，得到固定有互补序列和发夹结构的微球；

4)将所述序列1固定在微球上、封闭，得到固定有序列1的微球；将所述序列2固定在微球上、封闭，得到固定有序列2的微球；

5)将所述步骤3)得到的固定有互补序列和发夹结构的微球与待测样品进行反应，得到反应物，将所述反应物离心，得到上清液；

6)将所述步骤4)得到的固定有序列1的微球与步骤5)得到的上清液杂交，得到杂交物；将所述步骤4)得到的固定有序列2的微球与Cutsmart Buffer混合，得到混合物；将所述杂交物和混合物混合后进行孵育、离心，得到上清液；

7)将所述步骤6)得到的上清液与ABTS、双氧水混合后进行反应，在420nm处测量吸光度值，定义ΔA_420nm＝A_420nm-A₀，其中A_420nm为待测样品的吸光度值，A₀为EB病毒DNA浓度为0时的吸光度值，将得到的ΔA_420nm值代入ΔA_420nm＝0.107+0.002C_EB病毒DNA中，得到待测样品中EB病毒的含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1)DNA步行者探针与保护序列的摩尔比为1:4～7。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3)互补序列和发夹结构的摩尔比为1:15～25。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3)固定的条件包括：所述固定的温度为25～30℃，所述固定的时间为30min。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3)固定有互补序列和发夹结构的微球的表面修饰有1.2×10⁶～1.9×10⁶个互补序列，修饰有2.8×10⁷～2.9×10⁷个发夹结构。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤4)固定的条件包括：所述固定的温度为25～30℃，所述固定的时间为30min。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤5)反应的体系每20μL包括10μL固定有互补序列和发夹结构的微球、4μL 5×HEPES reactionbuffer、0.5μLZn²⁺、1.5μL DEPC-H₂O和4μL待测样品；

所述反应的条件包括：在37℃下反应1h。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤6)固定有序列1的微球与上清液的体积比为1:1；所述固定有序列2的微球与Cutsmart Buffer的体积比为1:1。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤7)上清液与ABTS、双氧水的体积比为1:4.5:4.5；

所述反应的条件包括：在37℃下反应8min。