[发明专利]人乳头瘤病毒16型表位嵌合L1的重组载体、重组蛋白、病毒样颗粒及其制备和应用

说明书

本发明构建了含有人乳头瘤病毒16型表位嵌合DNA片段的病毒样颗粒系统，首先将含有人乳头瘤病毒16型E7_49‑57表位嵌合主要衣壳蛋白L1DNA片段连接在质粒pET28a上构建重组质粒pET28a‑16L1‑E7_49‑57，然后将其转入大肠杆菌中进行培养得到重组蛋白，进而进行自组装得到病毒样颗粒(VLPs)；组装后的表位嵌合病毒样颗粒能够同时激发体液和细胞免疫应答。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及含有人乳头瘤病毒16型表位嵌合L1的重组载体、重组蛋白、病毒样颗粒及其制备和应用。

背景技术

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率居女性恶性肿瘤第二位,且发病逐渐趋于年轻化。据世卫组织报道，2018年全球宫颈癌新发病例57万，死亡人数31.1万,严重危害女性健康。目前宫颈癌预防性疫苗的研究较成功，国际上市的HPV疫苗分别是默沙东公司生产的四价疫苗佳达修-4(Gardasil-4)和九价疫苗佳达修-9(Gardasil-9)，以及葛兰素史克公司的二价疫苗希瑞适(Cervarix)，三种疫苗均是以体外表达的HPV L1衣壳蛋白自组装成VLPs为有效抗原，混合佐剂诱导机体产生中和抗体。此类疫苗能有效预防高危型HPV病毒感染，但对已经感染HPV的人群无效。

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是诱发女性宫颈癌的主要原因。已知发现的HPV亚型达200多种，其中HPV16和18型属于高危型中最易致癌型，超过70％的宫颈癌病变由此导致。HPV疫苗是控制宫颈癌的有效手段之一。HPV的主要衣壳蛋白L1可以单独表达并自组装成病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs)。VLPs与天然病毒的结构高度相似，将其免疫机体后可刺激产生高滴度的中和抗体，目前，利用VLPs研制的HPV预防性疫苗已用于临床。但是，此类疫苗诱导机体产生的细胞免疫应答较弱。HPV基因组的早期转录区(E区)编码的E7蛋白是导致细胞发生恶性转化的关键。E7_49-57表位能诱导T淋巴细胞分化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte，CTL)。

发明内容

基于上述技术问题，本发明的发明目的之一是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段。

本发明的发明目的之二是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段的重组载体。

本发明的发明目的之三是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段的重组载体的构建方法。

本发明的发明目的之四是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的重组蛋白。

本发明的发明目的之五是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1重组蛋白的构建方法。

本发明的发明目的之六是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的病毒样颗粒。

本发明的发明目的之七是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的病毒样颗粒的制备方法。

本发明的发明目的之八是提供了含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1的病毒样颗粒在制备人乳头瘤病毒疫苗的应用。

本发明提供的技术方案为：

含有人乳头瘤病毒16型E7_49-57表位嵌合L1 DNA片段，所述DNA片段的序列如SEQ IDNO.1所示。