[发明专利]一种依赖T5核酸外切酶构建重组质粒的预混液及其应用

权利要求书

1.一种构建重组质粒的方法，其特征在于，扩增目的DNA片段并将pUC19载体用限制性内切酶双酶切后，将所得线性化载体和DNA片段与预混液混合得到反应溶液，放置于冰水混合物中进行反应，转化，

所述预混液包括T5核酸外切酶和反应缓冲液；所述反应缓冲液由乙酸钾、Tris-乙酸、乙酸镁、DTT和甘油组成；

所述乙酸钾的浓度为75～120mM，所述Tris-乙酸的浓度为30～50mM，所述乙酸镁的浓度为15～30mM，所述DTT的浓度为1～3mM，所述甘油的体积分数为10％～15％；

所述T5核酸外切酶的加入浓度为0.05～0.1U/mL；

所述反应缓冲液的pH为7.5～8；

所述线性化载体和DNA片段的摩尔比为1：1～10；

所述反应的时间为5～10min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预混液为2x即用型预混液，所述预混液与所述反应溶液的体积比为1：2。