[发明专利]胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条及检测方法

权利要求书

1.胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于：

所述试剂条包括底板，以及粘贴于底板上的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次首尾相互重叠一段预设长度；

所述硝酸纤维素膜上通过划线包被幽门螺杆菌天然抗原；所述胶体金垫通过将标记胶体金的幽门螺杆菌重组蛋白抗原溶液加样到玻璃纤维素膜上，干燥后获得。

2.根据权利要求1所述的胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于，所述胶体金垫通过以下方法步骤制备：

步骤a.用0.1～0.3mol/L K₂CO₃溶液将胶体金溶液的pH调到7.0～9.0；

步骤b.将步骤a中的胶体金溶液置于磁力搅拌器上搅拌，按每100mL胶体金溶液加入0.5～2mg幽门螺杆菌重组蛋白抗原的用量将幽门螺杆菌重组蛋白抗原滴加到胶体金溶液中，继续搅拌2～3h；

步骤c.将步骤b中搅拌后的胶体金溶液加入到终浓度为1％BSA和1～2％的酪蛋白混合液中进行封闭标记60min；

步骤d.将步骤c中封闭标记后的胶体金溶液在12000～15000r/m条件下离心，弃上层清液，沉淀物用0.01mol/L PBS溶液重悬，将沉淀物重悬为原沉淀物体积的1/10，得重悬液；

步骤e.将步骤d制得的重悬液在2000～3000r/min条件下离心30min，取上层清液加入到葡聚糖凝胶层析柱纯化，得到纯度达90％以上的标记胶体金的幽门螺杆菌重组蛋白溶液；

步骤f.将步骤e制得的标记胶体金的幽门螺杆菌重组蛋白抗原溶液加样到玻璃纤维素膜上，在温度20℃～25℃的条件下干燥4～6h，制成胶体金垫，备用。

3.根据权利要求1所述的胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于，在所述硝酸纤维素膜上通过划线包被幽门螺杆菌天然抗原的方法步骤如下：

步骤i.用0.01mol/L的PBS将幽门螺杆菌天然抗原稀释成0.2～0.5mg/mL；

步骤ii.用点膜仪将经步骤i稀释后的幽门螺杆菌天然抗原在硝酸纤维素膜上按1μl/cm进行划线包被；

步骤iii.幽门螺杆菌天然抗原包被完成后，将硝酸纤维素膜在干燥间室温干燥，备用。

4.根据权利要求1所述的胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上还通过划线包被鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体，用于质控。

5.根据权利要求1所述的胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于，在所述硝酸纤维素膜上，通过划线包被鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体的方法步骤如下：

步骤①.用0.01mol/L的PBS将鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体稀释成0.2～0.5mg/mL；

步骤②.用点膜仪将经步骤i稀释后的鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体在硝酸纤维素膜上按1μl/cm进行划线包被；

步骤③.鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体包被完成后，将硝酸纤维素膜在干燥间室温干燥，备用。

6.根据权利要求1所述的胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于，所述试剂条的组装在干燥间内完成，具体步骤如下：

步骤I.在底板中央贴上包被好的幽门螺杆菌天然抗原硝酸纤维素膜；

步骤II.在硝酸纤维素膜上缘粘贴吸水滤纸；

步骤III.在硝酸纤维素膜下缘粘贴胶体金垫；

步骤IV.在胶体金垫下缘粘贴样品垫，完成后用裁切机将贴好的试纸板切成试纸条，并密封于铝箔袋中。

7.根据权利要求1-6任一权利要求所述的胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条，其特征在于，所述底板由PVC制成。