[发明专利]爪蛙嵌合体及其制备方法在审
| 申请号： | 202010928618.X | 申请日： | 2020-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN112175994A | 公开（公告）日： | 2021-01-05 |
| 发明（设计）人： | 陈永龙;李兰心;石照应 | 申请（专利权）人： | 南方科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/89;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 刘燚 |
| 地址： | 518055 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嵌合体 及其 制备 方法 | ||
1.爪蛙嵌合体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将荧光蛋白编码序列导入热带爪蛙受精卵，构建荧光蛋白标记的转基因热带爪蛙；
步骤2：将所述转基因热带爪蛙传代，得到荧光蛋白标记的热带爪蛙胚胎；
步骤3：将所述热带爪蛙胚胎的细胞转入非洲爪蛙囊胚腔，形成嵌合胚胎。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述荧光蛋白编码序列导入的方法为：将包含所述荧光蛋白编码序列的核酸片段通过显微注射的方法导入所述热带爪蛙受精卵。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述核酸片段还包括CAG启动子和终止序列，所述荧光蛋白编码序列位于所述CAG启动子和所述终止序列之间。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光蛋白编码序列编码增强绿色荧光蛋白。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，热带爪蛙抱对前一天注射15～25单位的人绒毛促性腺激素、抱对前1.5～2.5小时再次注射140～150单位的人绒毛促性腺激素。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，所述热带爪蛙胚胎在21～25℃的培养条件下培养。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，传代得到的荧光蛋白标记的热带爪蛙受精卵通过pH为8.0±0.2的半胱氨酸盐酸盐溶液脱去受精膜。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中，所述非洲爪蛙囊胚在14～16℃的培养条件下培养。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中，转入过程所用的培养液中包括链霉素和氨苄青霉素。
10.爪蛙嵌合体，其特征在于，采用权利要求1至9任一项所述的方法制得。
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