[发明专利]爪蛙嵌合体及其制备方法

说明书

本发明提供爪蛙嵌合体及其制备方法。该爪蛙嵌合体的制备方法包括以下步骤：将荧光蛋白编码序列导入热带爪蛙受精卵，构建荧光蛋白标记的转基因热带爪蛙；将转基因热带爪蛙传代，得到荧光蛋白标记的热带爪蛙胚胎；将热带爪蛙胚胎的细胞转入非洲爪蛙囊胚腔，形成嵌合胚胎。本发明实施例所提供的制备方法将转基因技术与异种移植技术相结合，将荧光蛋白的编码序列转入热带爪蛙受精卵，得到转基因热带爪蛙，传代后获得的荧光蛋白标记的转基因热带爪蛙胚胎的细胞移植进非洲爪蛙胚胎的囊胚腔中，可以借助荧光显微镜观察热带爪蛙细胞在非洲爪蛙胚胎里的发育情况。转基因方式得到的嵌合胚胎的单细胞内的荧光强度较为稳定，可以进行长期的追踪观察。

技术领域

本发明涉及异种移植技术领域，尤其是涉及爪蛙嵌合体及其制备方法。

背景技术

热带爪蛙(Xenopus tropicalis)和非洲爪蛙(Xenopus laevis)是两种外形相似，但染色体倍数、体型、生长环境不同的蛙类。四倍体的非洲爪蛙是发育生物学研究中的经典模式动物。由于其易于饲养而且每次抱对得到的胚胎数量多、体积大，非洲爪蛙常用于发育生物学研究中的胚胎分割、移植等。而热带爪蛙作为二倍体动物，可用于基因编辑、传代，且易于饲养繁殖，正逐渐成为新兴的发育遗传学研究模型。热带爪蛙和非洲爪蛙的胚胎都很容易获得，只需提前给雌蛙和雄蛙注射绒毛促性腺激素，它们便可自然抱对或人工授精。

由于它们染色体倍性不同，如果将两者进行异种移植，产生的如异种细胞间的交流、细胞复制分裂、分化速度的调控等问题对于进一步理解细胞发育具有重要意义。然而，现有的爪蛙胚胎移植多以同种爪蛙作为实验材料，异种移植的案例并不多见。其中很大一部分原因可能在于移植组织后续追踪的问题。目前一般通过注射细胞活性染料来解决，这种方法虽然方便快捷，但随着细胞分裂，单个细胞内的染料浓度会快速降低，对于长期的追踪十分不利。因此，有必要提供一种能够用于长期追踪的爪蛙嵌合体的制备方法。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种能够用于长期追踪的爪蛙嵌合体及其制备方法。

第一方面，本发明的一个实施例提供一种爪蛙嵌合体的制备方法，该方法包括以下步骤：

步骤1：将荧光蛋白编码序列导入热带爪蛙受精卵，构建荧光蛋白标记的转基因热带爪蛙；

步骤2：将转基因热带爪蛙传代，得到荧光蛋白标记的热带爪蛙胚胎；

步骤3：将热带爪蛙胚胎的细胞转入非洲爪蛙囊胚腔，形成嵌合胚胎。

本发明实施例的爪蛙嵌合体的制备方法至少具有如下有益效果：

本发明实施例所提供的制备方法将转基因技术与异种移植技术相结合，由于非洲爪蛙的同期胚胎比热带爪蛙稍大，因此将荧光蛋白的编码序列转入热带爪蛙受精卵，得到转基因热带爪蛙，传代后获得的荧光蛋白标记的转基因热带爪蛙胚胎的细胞移植进非洲爪蛙胚胎的囊胚腔中，从而可以借助荧光显微镜观察热带爪蛙细胞在非洲爪蛙胚胎里的发育情况，并且可以进一步研究异种细胞间的交流与排斥情况以及特定时期、特定位置的细胞的发育多能性。由于采用转基因的方式得到荧光蛋白标记，获得的嵌合胚胎的单细胞内的荧光强度较为稳定，可以进行长期的追踪观察。

根据本发明的一些实施例的制备方法，步骤1中，荧光蛋白编码序列导入的方法为：将包含荧光蛋白编码序列的核酸片段通过显微注射的方法导入热带爪蛙受精卵。

根据本发明的一些实施例的制备方法，核酸片段还包括CAG启动子和终止序列，荧光蛋白编码序列位于CAG启动子和终止序列之间。

根据本发明的一些实施例的制备方法，荧光蛋白编码序列可以是任选的能够编码荧光蛋白的核酸序列，例如，编码绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或红色荧光蛋白的核酸序列。