[发明专利]干细胞活性因子及其冻干粉剂

说明书

本发明公开了干细胞活性因子及其冻干粉剂，首先提取产房中剥离新生胎儿后的脐带组织放入脐带运输液，且经4～6°C环境下24～36h内冷藏后提取脐带间充质干细胞进行培养。通过采用本发明方法制备的干细胞活性因子及其冻干粉剂，不仅其制备方法简便，而且细胞来源具有均质性，符合干细胞的生物学特性，从而保证了干细胞源性活性因子的分泌量，及性能稳定性，并结合保湿锁水的透明质酸和甘油使得冻干粉溶解，直接作用于皮肤，已达到激活细胞功能，方便对肌肤进行修复，其修复效果好，使用方便，可快速对受损肌肤进行修复，达到抵抗肌肤衰老，修复肌肤屏障的目的，达到美容养颜，逆转时光，挽留青春的作用。

技术领域

本发明涉及干细胞活性因子技术领域，具体为干细胞活性因子及其冻干粉剂。

背景技术

在人体内，干细胞是一类保持未分化状态、具有高度自我更新和多项分化潜能的细胞，是机体所有功能细胞的祖宗细胞，在人体的发育及发育成熟后组织器官的维护中起重要作用，干细胞除了能分化为组织细胞修复组织损伤外，还有一个更重要的再生医学功能就是旁分泌细胞因子进行组织修复，如分泌神经细胞营养因子、促血管新生因子、造血支持因子、免疫调节因子、抗凋亡因子和趋化因子等，但是现有的干细胞活性因子提取方法只去除了部分杂质，但是糖类等杂质仍未除掉，并且还导致细胞因子大量损失，修复效果不佳，实际应用价值较低。

发明内容

本发明的目的在于提供干细胞活性因子及其冻干粉剂，具备应用价值高的优点，解决了现有的干细胞活性因子提取方法只去除了部分杂质，但是糖类等杂质仍未除掉，并且还导致细胞因子大量损失，修复效果不佳，实际应用价值较低的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：干细胞活性因子及其冻干粉剂，包括如下步骤：

（一）干细胞活性因子的提取：

A、提取产房中剥离新生胎儿后的脐带组织放入脐带运输液，且经4～6°C环境下24～36h内冷藏后提取脐带间充质干细胞进行培养；

B、当细胞融合度达65～85%时，用生理盐水轻轻冲洗培养瓶细胞1～3次，添加2～6ml消化液，室温放置1～3min，镜下观察细胞接近球形，轻轻拍打瓶壁，中止消化，然后转移至离心管混匀，取样计数，按照6000～8000个细胞/cm²进行传代，2～3天细胞密度达70～80%时，反复以上操作，以获得足够量的间充质干细胞，采用P3～P5代细胞制备；

C、当细胞活率达80～90%以上时，流式检测标志物合格；

D、细胞培养至最旺盛时，收集第一次上清至离心管，0.22～0.30μm滤膜过滤上清除菌，用生理盐水清洗2～4次培养瓶，弃去，然后采用细胞饥饿法加入10～15ml生理盐水/T225培养瓶继续培养12～24小时，待细胞变圆，吹打混匀后移至离心管，采用超声破碎仪破碎细胞后离心1400～1600r/min，离心4～6min，收集第二次上清，经0.22～0.30μm滤膜过滤除菌；其中所述生理盐水中添加了0.1～0.2mmol/L浓度的枸橼酸钠；

E、将上述步骤提取的第一次上清和第二次上清混合，采用截留分子量为10KD的纯化超滤系统浓缩，即得干细胞活性因子浓缩液。

（二）冻干粉剂的制备：

A、将上述步骤中制备获得的干细胞活性因子浓缩液，投入反应釜中备用；

B、选取海藻糖2～6份、金桔糖1～4份、甘氨酸2～7份、精氨酸2～6份、氨基乙酸1～4份、甘露醇6～11份、叔丁醇4～12份、蜂蜜12～22份，按比例混合，用振荡器混匀，制成悬液；

C、将上述步骤制备的悬液盛入冷冻盘中，随后放入3～5°C的冰箱中平衡45～60min后，再控温在-30～-25°C冷冻60～80min，然后控温在-80～-60°C冷冻60～90min；