[发明专利]一种替代中和效力测定的ELISA方法及其应用

说明书

本发明公开了一种IBV特异性中和表位抗原多肽，所述多肽为环状多肽，所述多肽的氨基酸序列为CSCPYVSYGRFCIQPDGSIKQC。本发明还公开了一种IBV特异性抗体及其制备方法。本发明还公开了一种替代中和效力测定的ELISA方法。本发明还公开了一种ELISA检测试剂盒，本发明应用建立的pELISA方法检测IBV抗体，并发现其与抗IBV中和抗体呈正相关，本发明可以用于IBV疫苗免疫效果的评价，IBV感染鸡的抗体水平测定，从而有益于鸡群健康管理等。

技术方案

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种替代中和效力测定的ELISA方法及其应用。

背景技术

传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的传染病。IBV感染鸡引起严重的呼吸道和肾脏疾病，导致重大的经济损失。虽然疫苗现在被广泛使用，但是在鸡群中仍然可以观察到IB的流行。

中和抗体是当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，能够与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，防止侵入细胞。中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白。病毒侵入机体之后，免疫细胞将中和抗体分泌到血液里，后者与血液里的病毒颗粒结合，阻止病毒感染细胞，破坏病毒颗粒，这样就把病毒“中和”掉了。

目前一般采用细胞培养方法检测血清中的中和抗体滴度，从而评估疫苗在免疫鸡群中的效用，然而，这个过程耗时费力，难以在基层实现。有报道称免疫荧光和酶联免疫吸附试验可以替代病毒的中和试验，可以更快更简单的方法来测定血清中和抗体的滴度，最近的研究表明，狂犬病毒和牛病毒性腹泻病毒糖蛋白ELISA可以分别测定人和牛接种疫苗后血清中的中和抗体效价。间接ELISA和中和试验之间抗体滴度的相关性也在寨卡病毒和人类乳突病毒中进行了研究。

虽然已经开发了用全病毒粒子或重组S1蛋白、N蛋白和非结构蛋白检测抗体的ELISA方法，迄今为止，还没有血清学方法替代传染性支气管炎病毒的中和试验。

发明内容

发明目的：IBV基因组编码4种主要结构蛋白：S、E、M和N，另外还有十五种非结构蛋白和一些附属蛋白。在这些蛋白中，S糖蛋白被认为是携带中和性表位主要的保护性抗原，可以诱导中和抗体的产生，然而，S1在不同毒株的IBV中差异很大。S2是一个高度保守的蛋白，携带广泛的抗原表位，S2蛋白也存在相关中和性抗原表位。我们的研究也表明S2存在一个广谱的中和表位。

本发明中，我们合成了该中和表位的多肽，在建立检测IBV抗体ELISA方法的基础上，发现其与中和抗体滴度具有相关性，可以用于中和抗体的评价测定。

本发明的所述多肽ELISA检测的血清抗体水平与中和抗体水平呈正相关性。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种替代中和效力测定的ELISA方法，所述该技术可以应用于疫苗免疫后的中和抗体水平评估。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种IBV特异性抗体及其制备方法。

本发明还要要解决的技术问题是提供了IBV特异性中和表位抗原多肽在制备IBV检测试剂盒方面的应用。

本发明最后要解决的技术问题是提供了一种ELISA检测试剂盒。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种IBV特异性中和表位抗原多肽，所述多肽为环状多肽，所述环状多肽的氨基酸序列为CSCPYVSYGRFCIQPDGSIKQC。

本发明内容还包括一种IBV特异性抗体，所述IBV特异性抗体特异性的与所述的IBV特异性中和表位抗原多肽结合。