[发明专利]一种用于检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平的报告载体及其应用有效
| 申请号： | 202010938703.4 | 申请日： | 2020-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN112080514B | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 陈雯莉;肖玉杰;聂海玲;廖浩 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/78 | 分类号： | C12N15/78;C12N15/65;C12N1/21;C12P19/36;C12R1/40 |
| 代理公司： | 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) 42247 | 代理人： | 陈凯 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 恶臭 假单胞菌胞内 di gmp 水平 报告 载体 及其 应用 | ||
1.一种用于检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平的报告载体，其特征在于：该报告载体含有第一启动子、第一报告基因、第二启动子和第二报告基因，所述第一启动子为lapA基因启动子，所述第一报告基因为lacZ基因，所述第一报告基因的表达受第一启动子控制，所述第二启动子为bcs基因启动子，所述bcs基因启动子的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNo.14所示，所述第二报告基因为egfp基因，所述第二报告基因的表达受第二启动子控制，第一报告基因和第二报告基因的方向相反。
2.如权利要求1所述的用于检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平的报告载体，其特征在于：所述第一启动子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.8所示，所述第一报告基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.5。
3.如权利要求1所述的用于检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平的报告载体，其特征在于：所述第二报告基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.11。
4.权利要求1-3任一所述的报告载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：以pBBR1MCS-5质粒为模板，以序列表中SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物；分别扩增第一报告基因、第一启动子、第二报告基因和第二启动子，并依次与所述PCR产物进行连接，测序验证，得到所述报告载体。
5.权利要求1所述的报告载体在检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平中的应用。
6.如权利要求5所述的报告载体在检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平中的应用，其特征在于，包括：将所述报告载体分别导入待测菌株和恶臭假单胞菌野生型菌株中，置于培养基平板上培养，待长出转化子，挑取单菌落于液体培养基中培养，测定并比较两种重组菌株细胞中报告基因的表达量，判断待测菌株胞内c-di-GMP水平的高低。
7.如权利要求5所述的报告载体在检测恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平中的应用，其特征在于：包括利用所述报告载体检测比较不同外界刺激对恶臭假单胞菌胞内c-di-GMP水平的影响。
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