[发明专利]一种复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法

说明书

本发明公开的属于复方丹参实验技术领域，具体为一种复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法，该复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法的具体步骤如下：S1：样品浓度筛选和细胞株筛选：CCK‑8法筛选复方丹参片作用细胞的合适药物质量浓度：选择实验细胞、细胞培养、复方丹参片供试样品的制备、细胞种板及给药。通过采用CCK‑8法筛选出细胞的有效浓度范围，再利用RTCA技术筛选出了对复方丹参片特异性依赖的细胞株，并进行了方法学考察，从而得出RTCA实验的有效浓度和观察时间的最佳范围，奠定了建立细胞指数溶出动力学的基础。

技术领域

本发明涉及复方丹参实验技术领域，具体为一种复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法。

背景技术

由于中药复方固体制剂的成分组成复杂，具有多成分、多靶点和整体作用的特点，复方多元成分的性质与体内外行为各异，释放溶出机制不一致。

需要通过观察细胞不同生理状态的变化，现有的筛选观察方法获取的信息不全面，且操作方式较为困难。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法，以解决上述背景技术中提出的现有的筛选观察方法获取的信息不准确，且操作方式较为困难的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法，该复方丹参片的细胞生物效应的筛选方法的具体步骤如下：

S1：样品浓度筛选和细胞株筛选：

CCK-8法筛选复方丹参片作用细胞的合适药物质量浓度：选择实验细胞、细胞培养、复方丹参片供试样品的制备、细胞种板及给药；

RTCA筛选复方丹参片的特定依赖性细胞株：RTCA实验细胞培养、复方丹参片RTCA实验样品的制备、RTCA测定、特定依赖性细胞株的筛选；

S2：实时细胞电子分析方法学考察：

样品制备；

精密度实验、稳定性实验。

优选的，所述步骤S1中选择的实验细胞为大鼠心肌细胞、人脐静脉内皮细胞、大鼠胸主动脉平滑肌细胞，所述细胞的培养方式为：

将复苏的人脐静脉内皮细胞置于饱和湿度的细胞培养箱中，用含10％FBS的DMEM培养基，在37℃、5％CO2条件下培养细胞至85％融合度时，用0.25％胰蛋白酶消化传代，倒置显微镜中观察，取对数生长期的细胞用于细胞实[；

将复苏的大鼠心肌细胞置于饱和湿度的细胞培养箱中，用含10％FBS的DMEM培养基，在37℃、5％CO2条件下培养细胞至85％融合度时，用0.25％胰蛋白酶消化传代，倒置显微镜中观察，取对数生长期的细胞用于细胞实验；

取体质量约220gSD大鼠，腹腔注射10％水合氯醛溶液(35mL/kg)，待大鼠麻醉后处死，迅速剪开胸腔并剪取大鼠胸主动脉组织，立即放入预冷的含PBS的DMEM培养基(含1×105U/L青链霉素)，并反复不断洗涤。用手术镊轻轻刮去血管外膜及血管内膜，将血管剪成1mm3左右的小块，分别均匀平铺于培养皿中，向培养皿中加入含20％FBS的培养液3～5mL，置于37℃、5％CO2的饱和湿度细胞培养箱中培养，直至传代，取对数生长期的细胞用于细胞实验。

优选的，所述复方丹参片供试样品的制备方法如下：取复方丹参片，置于研钵内捣碎，取0.32g，精密称定，置于50mL量瓶内，加入pH6.8的PBS溶液，超声30min溶解，再加入pH6.8的PBS溶液定容至刻度，滤过不溶物质，4℃储存备用，取上述溶液稀释不同倍数配成0、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、6.400mg/mL的药液用于CCK-8实验。