[发明专利]一种高活性转座酶及其应用

权利要求书

1.一种高活性转座酶的氨基酸序列，其特征在于，含有一个或多个的以下氨基酸序列：(1)对SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的以下位点进行氨基酸突变所得的具有转座酶活性的氨基酸序列：氨基酸92位、氨基酸119位或者氨基酸601位中的至少一个氨基酸位点；优选氨基酸92位、氨基酸119位或者氨基酸601位同时进行氨基酸突变；更优选为92位的异亮氨酸突变为天冬酰胺、119位的结氨酸突变为丙氨酸、601位的谷氨酰胺突变为精氨酸；

(2)在(1)中氨基酸92位、氨基酸119位或者氨基酸601位的氨基酸突变之外的一个或多个氨基酸进行缺失、取代、插入或添加所得具有转座酶活性的氨基酸序列；优选氨基酸92位、氨基酸119位或者氨基酸601位同时进行氨基酸突变之外的一个或多个氨基酸进行缺失、取代、插入或添加所得具有转座酶活性的氨基酸序列；更有选为92位的异亮氨酸突变为天冬酰胺、119位的结氨酸突变为丙氨酸、601位的谷氨酰胺突变为精氨酸之外的一个或多个氨基酸进行缺失、取代、插入或添加所得具有转座酶活性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的氨基酸序列，其特征在于，还含有功能性蛋白的氨基酸序列；所述功能性蛋白的氨基酸序列优选为核定位信号的氨基酸序列、表达EGFP绿色荧光蛋白的氨基酸序列、标签蛋白氨基酸序列或抗体氨基酸序列等。

3.一种高活性转座酶的氨基酸序列，其特征在于，含有一个或多个的SEQ ID NO:2所示氨基酸序列或SEQ ID NO:2所示氨基酸序列在氨基酸92位、氨基酸119位及氨基酸601位之外的一个或多个氨基酸进行氨基酸的缺失、取代、插入或添加所得具有转座酶活性的氨基酸序列。

4.一种含有一个或多个权利要求1-3任一项所述氨基酸序列的肽段。

5.一种含有一个或多个权利要求1-3任一项所述氨基酸序列或者一个或多个权利要求4所述肽段的蛋白，具有转座酶活性。

6.编码权利要求1-3任一项所述氨基酸序列或者权利要求4所述肽段或者权利要求5所述蛋白的核苷酸序列，含有一个或多个以下的核苷酸序列：(1)对SEQ ID NO:4所示核苷酸序列进行以下位点的碱基突变：碱基276、碱基356位、碱基900位或碱基1802位中的至少一个碱基位点；优选同时进行碱基275位、碱基356位、碱基900位和碱基1802位的碱基突变，更优选275位的碱基T突变为碱基C，356位的碱基T突变为碱基C，900位的碱基G突变为碱基A，1802位的碱基A突变为碱基G；或

(2)与(1)中突变后的核苷酸序列互补的核苷酸序列；或

(3)与(1)中突变后的核苷酸序列重叠并具有相同编码功能的核苷酸序列；或

(4)与(1)中突变后的核苷酸序列杂交并具有相同编码功能的核苷酸序列；或

(5)对(1)、(2)、(3)或(4)中核苷酸序列除基因突变位点之外的一个或多个碱基进行取代、缺失或者添加并具有相同编码功能的核苷酸序列；或

(6)与(1)、(2)、(3)或(4)中核苷酸序列具有至少80％同源性并具有相同编码功能的核苷酸序列；优选至少90％同源性并具有相同编码功能的核苷酸序列；更优选至少96％同源性并具有相同编码功能的核苷酸序列。