[发明专利]一种活性增强型NK细胞的制备方法在审
| 申请号： | 202010941221.4 | 申请日： | 2020-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN112029721A | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 汤朝阳;秦乐;吴迪;魏志辉;王翠花;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 广东昭泰体内生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 510663 广东省广州市高新技术产业开发区科学城揽月路*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 活性 增强 nk 细胞 制备 方法 | ||
1.一种活性增强型NK细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将外周血单个核细胞与饲养细胞进行第一次共培养，得到经第一次共培养的细胞群体；
(2)将所述经第一次共培养的细胞群体采用含有细胞因子组合物的培养基培养，得到活化的经第一次共培养的细胞群体；
(3)将所述活化的经第一次共培养的细胞群体与饲养细胞进行第二次共培养，得到活性增强型NK细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述饲养细胞包括Daudi细胞和/或B淋巴母细胞样细胞；
优选地，步骤(1)所述饲养细胞经γ射线处理；
优选地，所述γ射线的强度为100～200Gy。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述外周血单个核细胞与饲养细胞的细胞数比例为1:(1～10)；
优选地，所述外周血单个核细胞与Daudi细胞的细胞数比例为1:(6～8)；
优选地，所述外周血单个核细胞与B淋巴母细胞样细胞的细胞数比例为1:(3～5)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述第一次共培养的时间为3～5天。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述细胞因子组合物包括IL-12、IL-15和IL-18；
优选地，所述IL-12的终浓度为5～20ng/mL；
优选地，所述IL-15的终浓度为5～20ng/mL；
优选地，所述IL-18的终浓度为5～20ng/mL；
优选地，步骤(2)所述培养的时间为12～24h。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述饲养细胞包括K562细胞、Daudi细胞或B淋巴母细胞样细胞中的任意一种或至少两种的组合。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述活化的经第一次共培养的细胞群体与饲养细胞的细胞数比例为1:(0.1～5)；
优选地，所述活化的经第一次共培养的细胞群体与K562细胞的细胞数比例为1:(3～5)；
优选地，所述活化的经第一次共培养的细胞群体与Daudi细胞的细胞数比例为1:(0.1～3)；
优选地，所述活化的经第一次共培养的细胞群体与B淋巴母细胞样细胞的细胞数比例为1:(0.1～3)。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述第二次共培养的时间为1～2天。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将外周血单个核细胞与Daudi细胞和/或B淋巴母细胞样细胞按照1:(1～10)的比例进行第一次共培养3～5天，所述Daudi细胞和/或B淋巴母细胞样细胞预先经100～200Gyγ射线处理，得到经第一次共培养的细胞群体；
(2)将所述经第一次共培养的细胞群体采用含有终浓度为5～20ng/mLIL-12、5～20ng/mL IL-15和5～20ng/mL IL-18的培养基培养12～24h，得到活化的经第一次共培养的细胞群体；
(3)将所述活化的经第一次共培养的细胞群体与K562细胞、Daudi细胞或B淋巴母细胞样细胞按照1:(0.1～5)的比例进行第二次共培养1～2天，得到活性增强型NK细胞。
10.一种NK细胞，其特征在于，所述NK细胞采用权利要求1-9任一项所述的方法制备得到。
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