[发明专利]一种等温核酸扩增方法及应用

权利要求书

1.一种用于等温核酸扩增的重组酶组合物，其特征在于，所述组合物由UvsX蛋白、UvsY蛋白和GP32蛋白组成；所述UvsX蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示，所述UvsY蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述GP32蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。

2.根据权利要求1所述的用于等温核酸扩增的重组酶组合物，其特征在于，所述UvsX蛋白、UvsY蛋白和GP32蛋白的质量比为1：(0.2-4.6)：(0.77-2.3)。

3.一种重组酶组合物的等温核酸扩增体系，其特征在于，包括权利要求1或2所述的用于等温核酸扩增的重组酶组合物；优选的，所述扩增体系还包括反应启动剂、金黄色葡萄球菌的DNA聚合酶大片段、dNTP、ATP、Tris缓冲液、磷酸肌酸、肌酸激酶和/或聚乙二醇。

4.根据权利要求3所述的重组酶组合物的等温核酸扩增体系，其特征在于，所述反应启动剂为二价锰离子；优选的，为1mM-10mM的二价锰离子。

5.一种用于等温核酸扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的重组酶组合物或权利要求3或4所述的等温核酸扩增体系。

6.一种等温核酸扩增方法，其特征在于，将引物和模板加入权利要求3或4所述的等温扩增体系或权利要求5所述的等温核酸扩增试剂盒，于25-45℃，恒温反应20-60min。

7.根据权利要求6所述的等温核酸扩增方法，其特征在于，扩增的目的核酸为DNA或RNA。

8.根据权利要求7所述的等温核酸扩增方法，其特征在于，扩增的目的核酸为RNA时，还需在体系中加入逆转录酶。

9.权利要求1或2所述的用于等温核酸扩增的重组酶组合物，权利要求3或4所述的等温扩增体系、权利要求5所述的试剂盒、权利要求7或8所述的方法在用于等温核酸扩增中的应用，其特征在于，扩增的目的基因片段长度为100-2000bp。