[发明专利]CD19和CD22双靶点嵌合抗原受体NK细胞及其应用

说明书

本发明提供了CD19和CD22双靶点嵌合抗原受体NK细胞及其应用，所述嵌合抗原受体NK细胞表达特异性结合CD19和CD22的嵌合抗原受体；所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD22单链抗体。本发明的表达抗CD19和CD22双靶点嵌合抗原受体的NK细胞对CD19抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞、CD22抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞均具有杀伤作用，有利于避免免疫逃逸现象，降低了疾病复发的可能性。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及CD19和CD22双靶点嵌合抗原受体NK细胞及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)由肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区以及胞内信号转导区组成。通常，CAR分子包含的抗体单链片段可变区(single chain fragment variable，scFv)对肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)具有特异性结合作用，其通过铰链和跨膜区与信号传导分子的胞质结构域偶联。

近年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。除了T细胞，自然杀伤(NK)细胞也是机体重要的免疫细胞，是人体抗肿瘤、抗病原体感染的第一道防线。肿瘤经常以丢失肿瘤相关抗原和/或MHC分子作为逃逸T细胞免疫监控的手段，NK细胞可以以非MHC限制的方式裂解肿瘤细胞，而且无需肿瘤细胞表达相关抗原，因此，NK细胞被认为是过继性癌症免疫治疗的理想选择。

CAR可以将任意的特异性受体嫁接到免疫效应细胞上，如CIK细胞、NK细胞和γδT细胞。由于CAR-NK细胞的毒性相对较小，在异体NK细胞的免疫治疗应用上，不会产生免疫排斥作用，因此是一种比T细胞更安全的免疫治疗候选细胞。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了CD19和CD22双靶点嵌合抗原受体NK细胞及其应用，所述嵌合抗原受体NK细胞可以同时靶向CD19和CD22分子，对CD19阳性和/或CD22阳性的肿瘤细胞发挥细胞杀伤作用，在治疗血液恶性疾病方面具有广阔的前景。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种靶向CD19和CD22的嵌合抗原受体NK细胞，所述嵌合抗原受体NK细胞表达特异性结合CD19和CD22的嵌合抗原受体；

所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；

所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD22单链抗体。

本发明中，表达CD19和CD22双靶点的CAR-NK细胞对CD19阳性和/或CD22阳性细胞具有高效的靶向活性和杀伤能力，对CD19抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞、CD22抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞均具有高效的靶向作用，有利于避免免疫逃逸现象。

优选地，所述抗CD19单链抗体包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSAYTFGQGTKLEIKSGGGGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRHGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLDLQMNSLRVEDTAVYYCARRSITWYGGFDIWGQGTMVTVSSAQTTAPSVYPLAP。