[发明专利]一种牛肉胰酶消化液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种牛肉胰酶消化液及其制备方法，制备方法其包括如下步骤：新鲜牛肉搅碎，加入注射用水，加温至90℃，控制温度50～55℃，校正pH7.8～8.0；多次加入的蛋白酶总量为3U/每克牛肉，进行消化结束后加入冰醋酸并过滤溶液的残渣后即得所述的牛肉胰酶消化液。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的，涉及一种牛肉胰酶消化液及其制备方法。

背景技术

白喉是由白喉杆菌所引起的一种急性呼吸道传染病，以发热、气憋、声音嘶哑、犬吠样咳嗽、咽、扁桃体及其周围组织出现白色伪膜为特征，严重者全身中毒症状明显，可并发心肌炎和周围神经麻痹。白喉杆菌是严格寄生于人类的细菌，没有中间宿主，病人及带病菌者是唯一的传染源，主要是呼吸道飞沫传播，也可以通过被污染的器具和食物传播。

白喉疫苗系用白喉杆菌，在改良林氏培养基中培养产生的毒素，精制后经甲醛脱毒制成。疫苗最重要的组成成分就是白喉类毒素，是由白喉毒素在一定温度下加甲醛脱毒变成无毒而仍然保持有免疫性的生物制品，是预防白喉病最有效的制剂。

培养白喉杆菌的改良林氏培养基是由氮源、碳源、无机盐、生长因子等组成，白喉杆菌生长所需的氨基酸主要来自其中的牛肉胰酶消化液(林氏消化液)。目前，制备林氏消化液使用的酶多用新鲜牛胰脏自制而成，用这种酶消化制作的基础培养基在培养产毒效果上不理想，同时，因为牛胰脏处理的方法不标准以及动物伦理等因素，也导致培养基的培养效果的批间差异较大。因此，有必要将其生产工艺改进的更为标准化。

发明内容

本发明首先涉及一种牛肉胰酶消化液的制备方法，其包括如下步骤：

(1)10份去脂去结缔组织的牛肉搅碎，加入15份的注射用水，加温至90℃；

(2)再加入15份注射用水后，控制温度50～55℃，校正pH7.8～8.0；

(3)每半小时加入一次胰蛋白酶，多次加入的蛋白酶总量为3U/每克牛肉，进行消化，消化过程保持 pH在7.8～8.0，温度50～55℃，消化时间2～3小时；

(4)消化结束后加入适量冰醋酸灭活胰酶，随后加热至沸腾；优选的，冰醋酸的量为0.04份

(5)过滤溶液的残渣后即得所述的牛肉胰酶消化液。

优选的，所述的胰蛋白酶的加入方式为：每半小时加入一次，前三次各加入两份，第四次加入1份；

所述的pH校正为使用20％氢氧化钠溶液校正pH；

所述的消化过程保持pH在7.8～8.0为：每10分钟使用20％氢氧化钠溶液校正pH；

所述的过滤溶液为：使用滤布过滤溶液；

本发明还涉及所述的方法制备获得的牛肉胰酶消化液。

本发明还涉及使用所述的牛肉胰酶消化液制备的培养基。

所述的培养基(每升)的成分为：含氮量(AN)0.185％(wt)的牛肉胰酶消化液、10％酵母浸出液 500毫升、乳酸(CH3CHOHCOOH)25毫升、25％氯化钙溶液(CaCl2)32毫升、磷酸氢二钠(Na₂HPO₄) 3.2克、白喉Ⅰ号溶液40毫升、白喉Ⅱ号溶液20毫升、余量为水。

含氮量(AN)0.185％(wt)的牛肉胰酶消化液指添加牛肉胰酶消化液至培养基中的含氮量为0.185％ (wt)。

本发明还涉及所述的牛肉胰酶消化液在培养白喉杆菌中的应用。

本发明还涉及所述的牛肉胰酶消化液在制备白喉疫苗中的应用。