[发明专利]一种改良的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法在审
申请号: | 202010942972.8 | 申请日: | 2020-09-09 |
公开(公告)号: | CN112029848A | 公开(公告)日: | 2020-12-04 |
发明(设计)人: | 宋丽影;蒙裕欢;周婷婷;李雨艳;王双阁;范喜杰 | 申请(专利权)人: | 吉林金域医学检验所有限公司;广州市金域转化医学研究院有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/6806;C12Q1/6858 |
代理公司: | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人: | 庹玖玲;万志香 |
地址: | 130000 吉林省长春市高新*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 改良 mthfr 基因 c677t 多态性 检测 样本 处理 方法 | ||
1.一种MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)向待检测样本中加入裂解液,然后于68~75℃孵育4~6min;
(2)向步骤(1)获得的产物中加入能吸附DNA的磁性微粒,混匀,磁性分离后弃上清;
(3)对步骤(2)获得的磁性微粒进行洗涤,磁性分离后弃上清;
(4)向步骤(3)获得的磁性微粒中加入洗脱液,混匀,然后于70~75℃孵育4~6min,磁性分离后收集上清,获得DNA溶液;
(5)取步骤(4)获得的DNA溶液进行PCR扩增,得到处理后的样本;扩增引物如下:针对MTHFR基因C677T位点突变型的扩增引物包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ IDNO.2所示的下游引物;针对MTHFR基因C677T位点野生型的扩增引物包括如SEQ ID NO.3所示的上游引物和如SEQ ID NO.4所示的下游引物;所述SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.4所示引物上修饰有可检测的分子标记。
2.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,所述步骤(1)中于69~72℃孵育4~6min。
3.根据权利要求2所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(1)所述孵育为使用干浴器进行孵育。
4.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(3)所述洗涤方法为:先加入700±50ul清洗液I混匀,磁性分离后弃上清,再加入500±50ul清洗液II混匀,磁性分离后弃上清。
5.根据权利要求4所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,所述步骤(3)洗涤弃上清后再将样本离心2~4s,弃上清。
6.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,所述步骤(4)中于70~72℃孵育4~6min。
7.根据权利要求6所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(4)所述孵育为使用干浴器进行孵育。
8.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(5)所述PCR扩增体系中DNA的浓度为2~3.2ng/μl。
9.根据权利要求1或8所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(5)所述PCR扩增条件为:50℃2min;95℃3.5min;25~28个循环:94℃5s,60±1℃10s,65℃30s;65℃10min。
10.根据权利要求9所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(5)所述PCR扩增条件为:50℃2min;95℃3.5min;26~27个循环:94℃5s,60±1℃10s,65℃30s;65℃10min。
11.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,步骤(5)所述SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.4所示引物上修饰的可检测的分子标记为地高辛。
12.根据权利要求1~11任一项所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法,其特征在于,所述磁性分离方法为将样本直接放置到磁性器上分离5±1min。
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