[发明专利]一种改良的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法

权利要求书

1.一种MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向待检测样本中加入裂解液，然后于68～75℃孵育4～6min；

(2)向步骤(1)获得的产物中加入能吸附DNA的磁性微粒，混匀，磁性分离后弃上清；

(3)对步骤(2)获得的磁性微粒进行洗涤，磁性分离后弃上清；

(4)向步骤(3)获得的磁性微粒中加入洗脱液，混匀，然后于70～75℃孵育4～6min，磁性分离后收集上清，获得DNA溶液；

(5)取步骤(4)获得的DNA溶液进行PCR扩增，得到处理后的样本；扩增引物如下：针对MTHFR基因C677T位点突变型的扩增引物包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ IDNO.2所示的下游引物；针对MTHFR基因C677T位点野生型的扩增引物包括如SEQ ID NO.3所示的上游引物和如SEQ ID NO.4所示的下游引物；所述SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示引物上修饰有可检测的分子标记。

2.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中于69～72℃孵育4～6min。

3.根据权利要求2所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(1)所述孵育为使用干浴器进行孵育。

4.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(3)所述洗涤方法为：先加入700±50ul清洗液I混匀，磁性分离后弃上清，再加入500±50ul清洗液II混匀，磁性分离后弃上清。

5.根据权利要求4所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(3)洗涤弃上清后再将样本离心2～4s，弃上清。

6.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(4)中于70～72℃孵育4～6min。

7.根据权利要求6所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(4)所述孵育为使用干浴器进行孵育。

8.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(5)所述PCR扩增体系中DNA的浓度为2～3.2ng/μl。

9.根据权利要求1或8所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(5)所述PCR扩增条件为：50℃2min；95℃3.5min；25～28个循环：94℃5s，60±1℃10s，65℃30s；65℃10min。

10.根据权利要求9所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(5)所述PCR扩增条件为：50℃2min；95℃3.5min；26～27个循环：94℃5s，60±1℃10s，65℃30s；65℃10min。

11.根据权利要求1所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，步骤(5)所述SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示引物上修饰的可检测的分子标记为地高辛。

12.根据权利要求1～11任一项所述的MTHFR基因C677T位点多态性检测的样本处理方法，其特征在于，所述磁性分离方法为将样本直接放置到磁性器上分离5±1min。