[发明专利]一种诊疗一体化重组高密度脂蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种诊疗一体化重组高密度脂蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)将柠檬酸，N-(β-氨乙基-γ-氨丙基)甲基二甲氧基硅烷AEAPMS和水按质量比1:20～30:20～30密封到聚四氟乙烯不锈钢高压釜中，并置于干燥烘箱中，在180℃下水热处理12小时，将处理后的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯和石油醚萃取纯化得到的浅棕色溶液，然后通过旋转蒸发得到纯化产物，记为AEAPMS-CDs；

2)将去离子水、无水乙醇、氨水按摩尔比为50～60:90～100:1混合在圆底烧瓶中，超声条件下将SiO₂@Fe₃O₄纳米粒子加入到其中，待分散均匀后在黑暗处进行机械搅拌，并向其中加入正硅酸乙酯，随后缓慢滴加含有步骤1)制备的AEAPMS-CDs和3-氨基丙基三乙基硅烷的无水乙醇溶液，滴加完成后反应10～12h，反应结束后，进行磁场分离，将所得产物用蒸馏水和无水乙醇洗涤后置于真空烘箱烘干，得到Fe₃O₄@SiO₂–CDs，记为FC；其中按摩尔计，SiO₂@Fe₃O₄纳米粒子、正硅酸乙酯、AEAPMS-CDs、3-氨基丙基三乙基硅烷的用量分别为所述氨水的0.004～0.005、0.3～0.4、0.0015～0.002、0.015～0.02倍；

3)将质量比为1:8的胆固醇和卵磷脂溶解在1:1体积比的甲醇/氯仿中，然后在40℃下用旋转蒸发仪蒸干，然后加入PBS得到混合悬浮液并充分涡旋，并在冰浴中超声处理以获得囊泡溶液，将步骤2)制备的FC溶解在乙腈中得到油相，在磁力搅拌下将所述的油相注入到预热后的囊泡溶液中，其中，FC的用量按质量计是所述胆固醇的0.05倍，在40℃下连续搅拌后，将得到的纳米颗粒通过超速离心洗涤3次，并再次重悬于PBS中，得到脂质体，将脂质体和载脂蛋白ApoA-1在胆酸钠存在的条件下于冰浴中孵育8小时，按质量计，脂质体:载脂蛋白:胆酸钠＝2～3:1～2:2；最后将悬浮液在40000转进行超速离心30分钟得到诊疗一体化重组高密度脂蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种诊疗一体化重组高密度脂蛋白的制备方法，其特征在于，在步骤3)中制备所述的囊泡溶液是按以下步骤进行的：将质量比库1:8的胆固醇和卵磷脂溶解在体积比1:1的甲醇/氯仿中得到溶液1，将PEG-磷脂酰丝氨酸溶解在4％的乙醇溶液中得到溶液2，然后，在超声下将溶液1逐滴添加至溶液中，在40℃下用旋转蒸发仪将所得混合溶液中的溶剂蒸干，然后加PBS得到混合悬浮液并充分涡旋，然后在冰浴中超声处理以获得囊泡溶液。