[发明专利]一种诊疗一体化重组高密度脂蛋白的制备方法

说明书

本发明的一种诊疗一体化重组高密度脂蛋白的制备方法属于纳米材料技术领域，步骤包括制备AEAPMS‑CDs、制备Fe₃O₄@SiO₂–CDs、用卵磷脂、胆固醇、载脂蛋白A1和PEG磷脂酰丝氨酸合成重组高密度脂蛋白。本发明制备的诊疗一体化重组高密度脂蛋白具备靶向动脉粥样硬化斑块成像并治疗斑块的能力，在动脉粥样硬化的诊疗中具有重要价值。

技术领域

本发明属于纳米材料技术领域，具体涉及一种具有靶向核磁荧光成像及治疗能力的重组高密度脂蛋白的制备方法。

背景技术

动脉粥样硬化是许多心血管事件的主要诱因，例如心肌梗塞，缺血性中风，外周动脉疾病等，使其成为全球范围内主要的死亡原因。动脉粥样硬化是一种疾病状态，由于斑块在动脉壁积累而使动脉变得狭窄和硬化。尽管在动脉粥样硬化的临床诊断和治疗方面已经取得了很大进展，但是由于斑块病理生理学的复杂性，有效的诊断和治疗动脉粥样硬化依旧存在挑战。因此，现代研究中一直致力于开发用于诊断和治疗动脉粥样硬化斑块的特异性和选择性的高效方法。

目前在治疗方面，动脉粥样硬化疾病后期只能通过支架，手术等手段治愈。而早期则以口服药物治疗较为常见，但这种治疗方式却存在药物利用率低，见效慢，副作用严重等问题。当今，纳米医学处于纳米技术的前沿研究领域，该方向着重于设计并制造用于诊断，预防和治疗疾病的纳米颗粒，并得到实际应用。

核磁共振成像(MRI)作为一种无创性的对动脉血管壁观察和分析的影像技术已被广泛应用于动脉粥样硬化等多种心脑血管病的检测中。利用纳米材料进行MRI成像，则是添加了磁性纳米粒子作为被动对照剂，可以进一步增强对比。但是有学者认为核磁造影在区分灰度相近的区域时仍有一定难度。荧光成像灵敏度高，操作简便，但荧光的穿透力较差。另外单一的功能型药物体系已经无法满足现阶段动脉粥样硬化治疗的要求。只有将靶向定位、成像检测、控制治疗等多种功能综合应用才能发挥更好的诊疗作用。而在动脉粥样硬化疾病领域，诊疗一体的纳米载药体系的应用相对缺乏，亟待补充与完善。

发明内容

本发明的目的在于，克服现有技术的不足，提供一种兼具靶向、核磁荧光成像及治疗功能的重组高密度脂蛋白的制备方法。

本发明的具体技术方案如下：

一种诊疗一体化重组高密度脂蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)将柠檬酸，N-(β-氨乙基-γ-氨丙基)甲基二甲氧基硅烷AEAPMS和水按质量比1:20～30:20～30密封到聚四氟乙烯不锈钢高压釜中，并置于干燥烘箱中，在180℃下水热处理12小时，将处理后的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯和石油醚萃取纯化得到的浅棕色溶液，然后通过旋转蒸发得到纯化产物，记为AEAPMS-CDs；

2)将去离子水、无水乙醇、氨水按摩尔比为50～60:90～100:1混合在圆底烧瓶中，超声条件下将SiO₂@Fe₃O₄纳米粒子加入到其中，待分散均匀后在黑暗处进行机械搅拌，并向其中加入正硅酸乙酯，随后缓慢滴加含有步骤1)制备的AEAPMS-CDs和3-氨基丙基三乙基硅烷的无水乙醇溶液，滴加完成后反应10～12h，反应结束后，进行磁场分离，将所得产物用蒸馏水和无水乙醇洗涤后置于真空烘箱烘干，得到Fe₃O₄@SiO₂–CDs，记为FC；其中按摩尔计，SiO₂@Fe₃O₄纳米粒子、正硅酸乙酯、AEAPMS-CDs、3-氨基丙基三乙基硅烷的用量分别为所述氨水的0.004～0.005、0.3～0.4、0.0015～0.002、0.015～0.02倍；