[发明专利]一种制备细胞外囊泡的方法及其应用有效
| 申请号： | 202010944380.X | 申请日： | 2020-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN112011499B | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 张昊;秦西淳;周叶卿;贾才力;晁志祥;秦昊;刘修成 | 申请（专利权）人： | 徐州医科大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/09;A61K35/42;A61K35/44;A61P35/00 |
| 代理公司： | 南京灿烂知识产权代理有限公司 32356 | 代理人： | 王江南 |
| 地址： | 221004 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 细胞 外囊泡 方法 及其 应用 | ||
1.一种细胞外囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤为肺腺癌，所述细胞外囊泡为肺腺癌细胞产生的焦亡小体；所述细胞外囊泡，其制备方法为，建立细胞焦亡模型以诱导细胞发生焦亡；获取直径1~5 μm且包含半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1的焦亡小体。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述建立细胞焦亡模型以诱导细胞发生焦亡，为采用脂多糖和尼日利亚菌素共培养细胞，其中，所述脂多糖浓度为0.5 μg/ml~10 μg/ml, 所述尼日利亚菌素浓度为0.5 μmol/L~20 μmol/L。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述建立细胞焦亡模型以诱导细胞发生焦亡，为在培养环境为35℃~37℃，5％CO2，20％O2，当细胞密度融合至百分之八十以上时，加入脂多糖，培养5h后，加入尼日利亚菌素继续培养40~50min，诱导细胞发生焦亡，产生焦亡小体，收取细胞上清液。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述获取直径1~5 μm且包含半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1的焦亡小体，为在收取细胞上清液后，在离心力为300~700g下离心，离心时间为5~30min，弃掉上清液，收取沉淀；将所述沉淀用磷酸缓冲盐溶液重悬，在离心力为300~700g下离心，离心时间为5~30min，弃掉上清液，收取沉淀，得到所述焦亡小体。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述细胞，包括肺腺癌A549细胞。
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