[发明专利]鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白，其特征在于，编码所述鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)以鸭疫里默氏杆菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增，PCR扩增引物为：

BamD F-BamHⅠ：5′-GGATCCTACGACCTAGCAATGAAA-3′，

BamD R-NotⅠ：5′-GCGGCCGCCTGTTCTACTAACTTTTCT-3′；

2)将步骤1)获得的PCR产物与克隆载体连接，转化，提取质粒并测序；

3)将步骤2)测序正确的质粒与表达载体酶切连接，得重组原核表达质粒；

4)将步骤3)提取的重组质粒转化到表达宿主菌诱导表达，得鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白。

4.根据权利要求3所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，其特征在于，步骤2)中，与克隆载体pMD-19T simple vector连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α。

5.根据权利要求3所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述表达载体采用pET-28a载体，采用BamHⅠ和NotⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接。

6.根据权利要求3所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，其特征在于，步骤4)中，表达宿主菌采用大肠杆菌BL21。

7.根据权利要求6所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白的制备方法，其特征在于，步骤4)中，还包括：通过IPTG诱导大肠杆菌表达的包涵体利用6mol/L盐酸胍和LDAO进行复性，并通过镍柱进行纯化。

8.抗鸭疫里默氏杆菌感染的通用型亚单位疫苗，基于权利要求1或2所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白制成。

9.权利要求1或2所述的鸭疫里默氏杆菌BamD重组蛋白在制备防治鸭疫里默氏杆菌的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述防治鸭疫里默氏杆菌的药物包括抗鸭疫里默氏杆菌感染的亚单位疫苗。