[发明专利]一种超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法

权利要求书

1.一种超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的方法，其特征在于，具体包含以下步骤：

步骤1)、样品制备：称取适量当归在真空干燥箱95-110℃下烘烤以除去药材中的水分，冷却后粉碎，过标准筛200-800μm以均匀中药材，减少称量均匀度问题；

步骤2)、样品提取：药材过筛之后加入8-10ml的正己烷饱和的乙腈和2-4ml乙腈饱和的正己烷，以防止当归吸附各类黄曲霉毒素；在超声仪2k-10kHz中超声提取10-50min，以使提取液充分接触药材增大提取率；离心机中离心3-10min；静置保存；

步骤3)、免疫亲和富集当归中待测物：准确量取3-7ml静置过后的下层样品溶液，在氮吹仪下氮吹至干，加入0.5-1.5ml甲醇溶解，再加入10-30ml纯化水，充分混匀；

连接检查免疫亲和萃取系统，调节压力以4-8ml/mi流速加载样液通过免疫亲和柱，待样液全部通过免疫亲和柱后，用纯化水清洗柱子，除去残留在柱子里的当归提取物，在使1.5-5ml空气通过柱子，除去柱子中残留的超纯水；

步骤4)、样品洗脱：用0.5-1.5ml甲醇以1-2ml/min的流速洗脱待测物；洗脱液体用0.22微米有机相滤膜过滤于2ml棕色进样小瓶中保存待检；

步骤5)、利用超高效色谱串联三重四级杆质谱上机测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。

2.根据权利要求1所述的超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的方法，其特征在于，步骤3)中，在免疫亲和柱必须放置至室温后，排去保护液至三分之一，富集期间不得放空免疫亲和柱，待样液全部通过亲和柱后，需用两倍体积的纯化水进行冲洗，以便除去残留的药材提取物；氮吹温度为35℃。

3.根据权利要求1所述的超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的方法，其特征在于，步骤5)中，检测条件如下：

色谱条件：

(1)色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；

(2)流动相：A：0.5-2％醋酸5-7mmol/L乙酸铵溶液；B：甲醇；

(3)流速：0.2-0.32ml/min；进样体积：1-10μl；柱温：22-27℃；

(4)碰撞气为氮气；

质谱条件：

(1)电离方式：电喷雾离子源，正离子模式；采用三重四级杆质谱检测；

(2)毛细管电压：2200-2700V；喷嘴电压：1800-2300V；雾化器压力：36-44psi；

(3)质谱扫描方式：采用多反应离子检测。

4.根据权利要求3所述的超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的方法，其特征在于，超高效液相色谱梯度洗脱如下：

5.根据权利要求3所述的超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的方法，其特征在于，4种黄曲霉毒素定性定量离子