[发明专利]一种超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法

说明书

本发明公开了一种超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的方法，其特征在于，具体包含以下步骤：步骤1、样品制备；步骤2：样品提取；步骤3：免疫亲和萃取富集当归中待测物；步骤4：样品洗脱；步骤5：利用超高效色谱串联三重四级杆质谱上机测定。本发明吸收了免疫亲和萃取良好的富集能力与超高效液相良好的分离能力及较快的分离时间，以及特殊提取溶剂使得检测当归中各类痕量黄曲霉毒素想过显著。本发明通过对提取溶剂、稀释溶剂、液相分离流动相、质谱条件等重要方面均进行了探索和试验。

技术领域

本发明涉及一种黄曲霉毒素检测方法，尤其涉及一种超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的方法，该方法能够时间对不同产地的当归中痕量黄曲霉毒素的高效，准确的检测方法，特别提供一种以正己烷饱和的乙腈提取方式，经免疫亲和固相萃取方式对样品预处理，基于超高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时检测当归中黄曲霉毒素类4种生物毒素。

技术背景

黄曲霉毒素(AF)及其产生菌在自然界中分布广泛，有些菌株产生不止一种类型的黄曲霉毒素，自1962年分离出黄曲霉毒素以来，人们对其毒性进行了较深入的研究，发现其毒性属于极毒，其剧烈的毒性比人们熟知的剧毒药氰化钾要强10倍，北京医科大学曾用含20μg/kg黄曲霉毒素的饲料喂大鼠一年后即发肝癌。国外有报道说，AF为1μg/kg时即可诱发癌变，人摄入大剂量的黄曲霉毒素后可出现肝实质细胞坏死、胆管上皮细胞增生、肝脂肪浸润及肝出血等急性病变，前期症状为发烧、呕吐、厌食、黄疸，继而出现腹水，下肢浮肿并很快死亡，而慢性毒性表现为生长障碍，肝脏出现亚急性或慢性损伤，体重减轻，诱发肝癌等。目前已经从各类中药材中检出黄曲霉毒素。随着黄曲霉毒素污染中药材越来越多。因此，有必要建立一种能实现对中药材中痕量黄曲霉毒素的高效，准确检测方法，为中药材质量提供技术支持。

目前，国内和国际有关当归中黄曲霉毒素的检测标准十分有限，在我国现行的2015 版中国药典中，对各类中药材采取的前处理方法统一使用70％甲醇作为提取溶剂，且使用的第一法高效液相-柱后衍生荧光法容易造成假阳性的结果，第二法高效液相串联质谱法最低检测浓度仅为0.04ng/ml，第三法酶联免疫发操作复杂繁琐，灵敏度较低，在一定程度上不能实现快速准确检测。

用于黄曲霉毒素在自然界中分布广泛，各类中药材基质复杂，浓度通常为纳克的水平。这就要求黄曲霉毒素的检测方法不仅要有良好的抗干扰性，同时对于低浓度的检测还需要有较强的灵敏性与可量化性。随着科技的发展，近几年高效液相色谱串联质谱 (LC-MS/MS)等新技术的开发与应用，更使精确定性定量中药材中黄曲霉毒素变为可能，但是这些方法并不能通用于每一种中药材，不适用于复杂基质的分析检测。

近年来，国内外许多研究人员针对各类中药材中黄曲霉毒素检测技术方法开展了多方面的探索试验。

发明内容

本发明针对现有技术存在的欠缺，目的在于提供一种以免疫亲和固相萃取方式对样品预处理，基于超高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测当归中黄曲霉毒素B₁、B₂、 G₁、G₂的方法。

本发明的目的使通过如下技术方案来实现的

一种超高效液相色谱质谱法测定当归中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的方法，具体包含以下步骤

步骤1、样品制备：对当归进行预处理，对当归进行预处理，称取适量当归在真空干燥箱95-110℃烘烤以除去药材中的水分，冷却后使用中药材粉碎机粉碎，过标准筛 (200-800μm)备用。