[发明专利]一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，其特征在于，包括由重组的HCV非结构蛋白抗原包被得到的微孔板和分别独立包装的样本稀释液、阴性对照、阳性对照、酶标记物工作液、底物液A、底物液B及洗液，底物液A包括鲁米诺、邻苯基苯酚、4-咪唑苯酚及碳酸缓冲液(CB)；底物液B包括过氧化脲与磷酸缓冲液(PB)。

2.根据权利要求1所述的一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，其特征在于，底物液A包括质量浓度为0.8g/L的鲁米诺、质量浓度为0.008g/L的邻苯基苯酚、质量浓度为0.025g/L的4-咪唑苯酚、pH9.0且摩尔浓度为0.1mol/L的碳酸缓冲液(CB)；底物液B包括质量浓度为0.3g/L的过氧化脲、pH7.4且摩尔浓度为0.2mol/L的磷酸缓冲液(PB)。

3.根据权利要求1所述的一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，其特征在于，样本稀释液是含有体积浓度为20％的牛血清、pH7.4且摩尔浓度为0.01mol/L的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。

4.根据权利要求1所述的一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，其特征在于，阴性对照为热灭活的非HCV感染者(抗非结构蛋白抗体阴性)血清或血浆，且人类免疫缺陷病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、乙型肝炎病毒表面抗原测试呈阴性，含体积浓度为0.2％的ProClin 300防腐剂；

阳性对照为热灭活的HCV感染者(抗非结构蛋白抗体阳性)混合血清或血浆，且人类免疫缺陷病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、乙型肝炎病毒表面抗原测试呈阴性，含体积浓度为0.2％的ProClin 300防腐剂。

5.根据权利要求1所述的一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，其特征在于，酶标记物工作液是用酶标记抗体稀释液将酶标记物原液稀释至质量浓度为0.05μg/ml，酶标记物原液是质量浓度为1mg/ml的辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG标记物；酶标记抗体稀释液是含有质量体积浓度为5％的牛血清白蛋白(BSA)、体积浓度为0.5％的酶稳定剂、体积浓度为0.1％的吐温-20、质量浓度为5μg/ml的抗鼠抗体阻断剂、质量浓度为1μg/L的红色色素、体积浓度为0.2％的Proclin 300、pH7.4且摩尔浓度为0.01mol/L的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。

6.根据权利要求1所述的一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，其特征在于，洗液是含有体积浓度为0.5％的吐温-20、体积浓度为0.2％的Proclin300、pH7.4且摩尔浓度为0.01mol/L的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。

7.一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在重组的HCV非结构蛋白抗原包被微孔板中，先加入样本稀释液100μl，再加入10μl待测样本，盖上封板膜，振荡混匀，37℃±1℃温度下温育30min，洗涤除去未结合的组分；

(2)设抗体阳性对照1孔，阴性对照2孔，分别加入阴、阳性对照各100μl；设空白对照孔1孔，不加任何样本；盖上封板膜，振荡混匀，37℃±1℃温度下温育30min，洗涤除去未结合的组分；

(3)除空白对照孔，其余孔内加入100μl酶标记物工作液，盖上封板膜，振荡混匀，37℃±1℃温度下温育30min，洗涤除去未结合的酶标记物工作液；

(4)每孔依次加入底物液B、底物液A各50μl，振荡混匀室温避光放置15分钟；其中底物液A包括鲁米诺、邻苯基苯酚、4-咪唑苯酚及碳酸缓冲液(CB)；底物液B包括过氧化脲及磷酸缓冲液(PB)；

(5)用化学发光免疫分析仪测量每孔的相对发光强度值RLIV，当样本RLIV与阴性对照RLIV均值的比值≥2.1时，为阳性；反之，为阴性。