[发明专利]一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种检测HCV感染者血清中抗非结构蛋白抗体的化学发光试剂盒，包括由重组的HCV非结构蛋白抗原包被得到的微孔板和分别独立包装的样本稀释液、阴性对照、阳性对照、酶标记物工作液、底物液A、底物液B及洗液，底物液A包括鲁米诺、邻苯基苯酚、4‑咪唑苯酚及碳酸缓冲液(CB)；底物液B包括过氧化脲与磷酸缓冲液(PB)；该试剂盒可以对HCV感染者血清中的抗非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)抗体进行体外定性/定量测定，建立HCV感染者血清中抗非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)抗体的检测技术并进行方法学评价，该试剂盒可应用于丙型病毒性肝炎的筛查诊断、病情监测、预后评估、疾病机理和流行病学研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及化学发光免疫分析定性/定量试剂盒，具体涉及一种应用重组的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)非结构蛋白抗原(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)包被微孔板，检测生成的包被抗原-待测抗体-酶标二抗复合物，可以对HCV感染者血清中的抗非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)抗体进行体外定性/定量测定，建立HCV感染者血清中抗非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)抗体的检测技术并进行方法学评价，该试剂盒可应用于丙型病毒性肝炎的筛查诊断、病情监测、预后评估、疾病机理和流行病学研究。

背景技术

1974年Golafield M首先报告输血后非甲非乙型肝炎，1989年Choo QL，Weiner AJ等在Houghton M领导下利用分子生物学技术克隆出了非甲非乙型肝炎的主要病原体随后被命名为丙型肝炎病毒(HCV)的基因序列，由此引起的疾病称为丙型肝炎(Hepatitis C)。现已证实丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，50-85％感染者成为慢性感染，并可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，10-30％患者可发展为肝硬化，其中肝细胞癌(HCC)年发生率约1-7％，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。2014年世界卫生组织最新统计表明：全世界大约超过1.85亿人感染了HCV，其中感染率以东亚(3.8％)、中亚(3.7％)、北非/中东(3.6％)、南亚(3.4％)及东欧(2.9％)为最高，每年全球约35万人死于与丙肝有关的疾病。我国丙型肝炎每年发病人数呈逐年上升趋势，中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会公布的历年“全国法定传染病疫情情况”资料显示：从2007年发病人数不足9.2万上升到2014年的20.3万；据此推算国内大约有4000万HCV感染者，各省市感染率不尽相同，平均感染率约为3.2％，是HCV感染的高流行区。随着HCV感染治疗进入泛基因时代，重组蛋白酶抑制剂的直接使用(Direct Acting Antiviral，DAA)可大大提高患者实现持续病毒学应答的比例(＞95％)，有望改变HCV感染威胁的严峻局面，但目前DAA治疗尚面临着诸多有待解决的问题：(1)“边缘人群”无法接受有效治疗，如注射毒品者、服刑人员以及男同性恋等，加剧了疾病的流行；(2)经规范化DAA治疗后，仍有部分患者未出现持续病毒学应答或治疗失败，且DAA治疗并不能防止HCV再次感染；(3)医保支付比例低、治疗费用昂贵，患者每疗程治疗费用在数万元-数十万元人民币。由此可知，慢性HCV感染在未来很长一段时间内依旧是人类健康和全球公共卫生安全的重大威胁。