[发明专利]一种动物外周血红细胞的制备方法

权利要求书

1.提供一种红细胞的提取工艺，包括以下步骤 ：

（1）准备：准备新鲜动物新鲜全血（宰杀0.5-2h以内）；

（2）预处理：将新鲜动物新鲜全血用离心力在200-800g下，离心20-40min后使用0.22-0.45nm滤膜进行过滤，加入0.01-0.5%的抗氧剂，0-10℃下静止8-12h；

（3）粗提取：将（2）中样本用离心力在200-800g下，离心20-40min；离心后出现分层，除去最上层1-3.0ml样本，剩下的样本小心吸取2-4.5ml样本；然后将吸取的样本混匀；重复上述操作2-5次；

（4）阻断过程：在离心管中吸取上述（3）样本，加入2-5倍体积细胞阻断剂；温度在4-10℃下，离心力为400-900g，离心15-45min；除去离心管上方2.5-4.5ml样本，小心吸取剩余样本2-3ml；重复上述操作1-3次；

（5）溶解过程：在离心管中吸取（4）样本，加入适量体积的细胞溶解剂；在0-4℃下静止放置1-3h；混匀，离心力为50-300g，离心5-15min，彻底去除上清液，再向样本中加入适量原体积的细胞溶解剂，离心力为50-300g，离心5-15min，彻底去除上清液；

（6）保存：向（5）中添加细胞固定剂和稳定剂。

2.根据权利要求1，所述的新鲜动物全血来源为猪、羊、牛中的一种。

3.根据权利要求1，所述的细胞阻断剂为0.1-50mM/L丙三醇缓冲液、丙二醇缓冲液、TRIS缓冲液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠中的一种或两种，pH在6.5-8.0之间。

4.根据权利要求1，所述的抗氧剂为10-25mM/L亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、硫代硫酸钠中的一种。

5.根据权利要求1，所述的细胞溶解剂为50-200mM/L磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸、甘氨酸-柠檬酸、Tris、PIPES、柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钠中的一种或两种；pH在7.0-8.5之间。

6.根据权利要求5，所述的细胞溶解剂添加量为细胞溶解剂：样本在2.5-5.0:1之间。

7.根据权利要求1，所述的细胞固定剂为EDTA-2K、EDTA-2Na、吐温系列、曲拉通系列中的一种，浓度为5-50g/L。

8.根据权利要求1，所述的稳定剂为DDT、蔗糖、AES、海藻糖、甘露醇、甘油、葡萄糖中的一种或两种。