[发明专利]一种动物外周血红细胞的制备方法

说明书

一种动物外周血红细胞的制备方法本发明涉及红细胞制备技术领域，特别涉及一种动物红细胞的制备方法。目前制备动物外周血红细胞方法很多。但是提取率均较低，比较耗时，成本较高。制备的红细胞的有效保存时间短，导致需要经常配制和造成小鼠红细胞的浪费。本发明的目的在于提供一种操作简便、成本低、稳定性高、提取率高的红细胞提取工艺及红细胞保存的方法。本发明提供一种红细胞的提取工艺，包括以下步骤：(1)准备(2)预处理(3)粗提取(4)阻断过程(5)溶解过程(6)保存，6个步骤。

技术领域

本发明涉及红细胞制备技术领域，特别涉及一种动物红细胞的制备方法。

背景技术

红细胞中含有血红蛋白，因而使血液呈红色。血红蛋白中有铁元素，所以贫血的人宜多吃铁含量丰富的食物和蛋白质，来补血。血红蛋白能和空气中的氧结合，因此红细胞能通过血红蛋白将吸入肺泡中的氧运送给组织，而组织中新陈代谢产生的一部分二氧化碳也通过红细胞运到肺部通过肺泡同体外的氧气进行气体交换，将二氧化碳排出体外。

红细胞呈红色，那是因为红细胞富含血红蛋白。血红蛋白含铁，它在含氧量高的地方容易与氧结合，在含氧量低的地方又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。红细胞在肺部获取氧，然后随血液流动，在全身各处毛细血管将氧释放，供细胞利用。

目前制备动物外周血红细胞方法很多。但是提取率均较低，比较耗时，成本较高。制备的红细胞的有效保存时间短，导致需要经常配制和造成小鼠红细胞的浪费。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便、成本低、稳定性高、提取率高的红细胞提取工艺及红细胞保存的方法。

本发明提供一种红细胞的提取工艺，包括以下步骤 ：

(1)准备：准备新鲜动物新鲜全血（宰杀0.5-2h以内）；

(2) 预处理：将新鲜动物新鲜全血用离心力在200-800g下，离心20-40min后使用0.22-0.45nm滤膜进行过滤。加入0.01-0.5%的抗氧剂，0-10℃下静止8-12h；

(3) 粗提取：将（2）中样本用离心力在200-800g下，离心20-40min。离心后出现分层，除去最上层1-3.0ml样本，剩下的样本小心吸取2-4.5ml样本。然后将吸取的样本混匀。重复上述操作2-5次；

(4) 阻断过程：在离心管中吸取上述（3）样本，加入2-5倍体积细胞阻断剂。温度在4-10℃下，离心力为400-900g，离心15-45min。除去离心管上方2.5-4.5ml样本，小心吸取剩余样本2-3ml。重复上述操作1-3次；

(5) 溶解过程：在离心管中吸取（4）样本，加入适量体积的细胞溶解剂。在0-4℃下静止放置1-3h。混匀，离心力为50-300g，离心5-15min，彻底去除上清液，再向样本中加入适量原体积的细胞溶解剂，离心力为50-300g，离心5-15min，彻底去除上清液；

(6) 保存：向（5）中添加细胞固定剂和稳定剂。

本发明新鲜动物全血来源为猪、羊、牛中的一种全血。

本发明的细胞阻断剂为0.1-50mM/L丙三醇缓冲液、丙二醇缓冲液、TRIS缓冲液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠中的一种或两种，pH在6.5-8.0之间。

本发明的抗氧剂为10-25mM/L亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、硫代硫酸钠中的一种。

本发明的细胞溶解剂为50-200mM/L磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸、甘氨酸-柠檬酸、Tris、PIPES、柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钠中的一种或两种。pH在7.0-8.5之间。

本发明的细胞溶解剂添加量为细胞溶解剂：样本在2.5-5.0:1之间。