[发明专利]酱油和醋中组胺的测定方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种酱油和醋中组胺的酶偶联检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）样品经氧化石墨烯脱色；（2）由S-腺苷甲硫氨酸提供甲基，经组胺-N-甲基转移酶催化，生成t-甲基组胺和S-腺苷同型半胱氨酸；（3）S-腺苷同型半胱氨酸经S-腺苷同型半胱氨酸水解酶迅速转化成同型半胱氨酸和腺嘌呤核苷；（4）腺嘌呤核苷经腺嘌呤核苷酶作用，水解成腺嘌呤和核糖，而核糖迅速被核糖-1-脱氢酶氧化，生成核糖酸和NADPH；（5）利用NADPH在340nm有吸收峰，在340nm处测定吸光度值，通过组胺标准曲线，可以确定样品中组胺的含量；

所述方法具体包括如下步骤：取酱油或醋样品溶液到离心管中，加入50~200 mg氧化石墨烯，振荡混匀1~5min，5000~10000 r/min离心，5~10min，收集上清液，为待测溶液；取待测溶液入试管中，加入蒸馏水，混匀；加入试剂1，混匀，再加入试剂2，混匀，于37℃水浴中保温反应10min，于分光光度计中340nm测定吸光度值；根据标准曲线和稀释倍数计算出样品中组胺含量；

其中，所述的试剂1与试剂2的体积比为1:1-2；所述试剂1为：10~100 mmol/L 缓冲液、10~50 mmol/L MgCl₂、10~50 mmol/L KCl、10~200 mmol/L NaCl、1~50 mmol/L S-腺苷甲硫氨酸、0.1~10 mmol/L NADP⁺、0.1~200 g/L 保护剂；

所述的试剂2为：10~100 mmol/L 缓冲液、1~1000 U/L 组胺-N-甲基转移酶；

1~1000 U/L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶、1~1000 U/L 嘌呤核苷酶、1~1000 U/L 核糖-1-脱氢酶、0.1~200 g/L 保护剂；

所述试剂1和试剂2的缓冲液各自独立地选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种，且所述试剂1和试剂2的pH相同；

所述的试剂1和试剂2的保护剂各自独立地选自甘油、牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠、甘露醇、蔗糖、壳聚糖、灭活的胎牛血清、叠氮钠、吐温、曲拉通X-100中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的酱油和醋中组胺的酶偶联检测方法所用的测定试剂盒，其特征在于：该试剂盒具体由试剂1和试剂2组成，其中：

试剂1为：

10~100 mmol/L 缓冲液

10~50 mmol/L MgCl₂

10~50 mmol/L KCl

10~200 mmol/L NaCl

1~50 mmol/L S-腺苷甲硫氨酸

0.1~10 mmol/L NADP⁺

0.1~200 g/L 保护剂

试剂2为：

10~100 mmol/L 缓冲液

1~1000 U/L 组胺-N-甲基转移酶

1~1000 U/L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶

1~1000 U/L 腺嘌呤核苷酶

1~1000 U/L 核糖-1-脱氢酶

0.1~200 g/L 保护剂；

所述试剂1和试剂2的缓冲液各自独立地选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种，且所述试剂1和试剂2的pH相同；

所述的试剂1和试剂2的保护剂各自独立地选自甘油、牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠、甘露醇、蔗糖、壳聚糖、灭活的胎牛血清、叠氮钠、吐温、曲拉通X-100中的一种或多种。