[发明专利]一种检测果蔬中诺如病毒的方法

权利要求书

1.一种检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、将果蔬样品与洗脱缓冲液混合，收集上清液；

步骤2、在所述上清液中加入磁性探针，捕获所述上清液中的诺如病毒；

步骤3、将结合诺如病毒的磁性探针加入到溶液中，加热离心后取上清得到含有诺如病毒RNA的溶液，并进行RT-(q)PCR检测；

其中，所述磁性探针包括羧基化硅包Fe₃O₄磁性粒子和猪胃粘膜蛋白，所述羧基化硅包Fe₃O₄磁性粒子和所述猪胃粘膜蛋白通过偶联剂共价结合。

2.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤1中，所述洗脱缓冲液为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液，包括0.01-1％曲拉通、10-50U果胶酶、0.01-0.1mol/L甘氨酸，pH为8-11。

3.如权利要求1或2所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤1中，将所述果蔬样品和所述洗脱缓冲液混合20-60min。

4.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤2中，所述磁性探针通过包括如下步骤制备得到：

步骤2.1、将FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O溶解于去离子水中，在氮气保护下加入氨水，制备得到Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤2.2、将环己烷、正己醇、曲拉通与水混合得到反相微乳液，并加入所述Fe₃O₄磁性纳米粒子，随后将氨水、TEOS依次加入到所述反相微乳液中，反应得到硅包Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤2.3、将所述硅包Fe₃O₄磁性纳米粒子分散于甲苯中，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，在氮气保护下反应得到氨基化硅包Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤2.4、将所述氨基化硅包Fe₃O₄磁性纳米粒子分散于二甲基甲酰胺中，加入丁二酸酐，反应得到羧基化硅包Fe₃O₄磁性粒子；

步骤2.5、将所述羧基化硅包Fe₃O₄磁性粒子加入到2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液中，加入EDC反应30min后收集沉淀，将沉淀复溶于所述2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液中，加入猪胃粘膜蛋白、甘氨酸后得到所述磁性探针。

5.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤2中，调节所述上清液的pH为9.5。

6.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤2中，所述磁性探针的添加量为20-150μg。

7.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤2中，所述磁性探针与所述上清液的混合时间为10-50min。

8.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤3中，所述加热温度为80-100℃，加热时间为5-20min。

9.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤3中，所述离心的转速为10000rpm-20000rpm，离心时间为5-30min。

10.如权利要求1所述的检测果蔬中诺如病毒的方法，其特征在于，步骤3中，所述溶液为无RNA酶的水。