[发明专利]食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法在审
| 申请号： | 202010948663.1 | 申请日： | 2020-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN112255415A | 公开（公告）日： | 2021-01-22 |
| 发明（设计）人： | 余丙洁;惠琦;杨选鑫 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/31 |
| 代理公司： | 杭州知闲专利代理事务所(特殊普通合伙) 33315 | 代理人： | 张勋斌 |
| 地址： | 325036 浙江省温州市瓯海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 食蟹猴 血清 fgf 21 浓度 检测 方法 | ||
1.一种食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在预包被兔抗人FGF-21多抗的96微孔板上加入待测血清样品进行孵育；
(2)洗板再加入检测抗体进行孵育；
(3)洗板后加入酶标抗体进行孵育；
(4)洗板后加入HRP底物四甲基联苯胺进行避光孵育，然后加入终止液终止酶反应，测定450nm处的吸光度；
(5)根据吸光度的值计算得到血清中的FGF-21浓度。
2.根据权利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，所述的待测血清为食蟹猴血清。
3.根据权利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，待测血清样品的用量为100μL/孔；
孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为1～1.5h。
4.根据权利要1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的检测抗体为生物素化人FGF-21多抗，用量为100μL/孔；
孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为1～1.5h。
5.根据权利要1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的酶标为辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，用量为100μL/孔；
孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为20～30min。
6.根据权利要1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的HRP底物四甲基联苯胺的用量为100μL/孔；
孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为15～20min。
7.根据权利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(5)中，将待测样品的吸光度的值与配制的标准曲线法进行比对，获得血清中的FGF-21浓度。
8.根据权利要求7所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，标准曲线拟合方法如下：以浓度对数为横坐标，吸光度(OD值)为纵坐标制备标准曲线，采用Origin7.5数据统计软件中四参数Log-Logistic(4-PL)模型拟合，其标准曲线成Sigmoidal型曲线。
9.根据权利要求7所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(5)中，配制标准曲线所用的生物基质为10％食蟹猴空白血清；
步骤(1)中，待测血清以空白血清稀释一定倍数后再以Assay buffer稀释10倍。
10.根据权利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述待测血清样品的待测含量在31.25pg/mL～4000pg/mL。
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