[发明专利]食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法

说明书

本发明公开了一种食蟹猴血清中FGF‑21浓度的检测方法，包括以下步骤：(1)在预包被兔抗人FGF‑21多抗的96微孔板上加入待测血清样品进行孵育；(2)洗板再加入检测抗体进行孵育；(3)洗板后加入酶标抗体进行孵育；(4)洗板后加入HRP底物四甲基联苯胺进行避光孵育，然后加入终止液终止酶反应，测定450nm处的吸光度；(5)根据吸光度的值计算得到血清中的FGF‑21浓度。该检测方法具有较高的准确度和精确度，并且受到干扰小，可以对成纤维细胞生长因子21的作用机制进行更好地研究。

技术领域

本发明属于生化检测领域，具体涉及一种血清中FGF-21浓度的检测方法。

背景技术

成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)是近几年发现的一种新的调节血糖的因子，由于没有特异性的葡萄糖吸收细胞，故其生物学活性方法的开发一直是难点。

在对成纤维细胞生长因子21进行研究的过程中，我们经常需要知道血清中FGF21的准确含量，以便进行进一步的研究其代谢过程和对相关病症的影响。目前，研究人员经常选用食蟹猴来FGF21药代动力学，不过针对食蟹猴血清中FGF21的含量的快速测定方法，还未见专利报道。

发明内容

本发明提供了一种食蟹猴血清中FGF-21浓度的检测方法，该检测方法检测具有较高的准确度和灵敏度，受到的干扰小。

一种血清中FGF-21浓度的检测方法，包括以下步骤：

(1)在预包被兔抗人FGF-21多抗的96微孔板上加入待测血清样品进行孵育；

(2)洗板再加入检测抗体进行孵育；

(3)洗板后加入酶标抗体进行孵育；

(4)洗板后加入HRP底物四甲基联苯胺进行避光孵育，然后加入终止液终止酶反应，测定450nm处的吸光度；

(5)根据吸光度的值计算得到血清中的FGF-21浓度。

该检测方法的测定原理如下：

该试剂盒基于双抗体夹心ELISA法定量检测食蟹猴血清FGF-21的浓度。在预包被兔抗人FGF-21多抗的96微孔板上，加入含有FGF-21的标准溶液或样品，使其与固相抗体结合。洗去未结合物质后，加入检测抗体(生物素化人FGF-21多抗)。洗去未结合的抗体后，加入辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(STP-HRP)。洗涤后加入HRP底物四甲基联苯胺(TMB)显色，终止酶反应后，测定450nm处的吸光度(OD值)。吸光强度与样品中所含FGF-21的浓度成正比。

作为优选，所述的待测血清为食蟹猴血清。

作为优选，步骤(1)中，待测血清样品的用量为100μL/孔；

孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为1～1.5h。

作为优选，步骤(2)中，所述的检测抗体为生物素化人FGF-21多抗，用量为100μL/孔；

孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为1～1.5h。

作为优选，步骤(3)中，所述的酶标为辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，用量为100μL/孔；

孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为20～30min。

作为优选，步骤(4)中，所述的HRP底物四甲基联苯胺的用量为100μL/孔；

孵育的温度为25～30℃，孵育的时间为15～20min。

作为优选，步骤(5)中，将待测样品的吸光度的值与配制的标准曲线法进行比对，获得血清中的FGF-21浓度。