[发明专利]一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病病毒活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种预防非洲猪瘟的重组伪狂犬病病毒活疫苗，其特征在于该疫苗是用重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株作为生产种毒制备的；

所述重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株含有SEQ ID No .1所示的重组序列；

所述SEQ ID No .1所示的重组序列包括sacas9SgRNA基因序列，和编码SEQ ID No .2，SEQ ID No .3和SEQ ID No .4所示CD2V/P72/B602L蛋白序列的基因序列。

2.如权利要求1所述的一种预防非洲猪瘟的重组伪狂犬病病毒活疫苗，其特征在于所述的该重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株的构建方法，包括：

（1）将非洲猪瘟病毒的CD2V/P72/B602L和sacas9SgRNA 干扰素区域重组融合连接入真核质粒载体构建重组臂重组质粒；

（2）用脂质体转染的方法将所述重组臂重组质粒转染至接种了伪狂犬病病毒的BHK细胞株中；通过荧光显微镜观察得到表达有CD2V/P72/B602L蛋白的重组病毒；

（3）进行重复低密稀释度铺板克隆筛后获得稳定表达CD2V/P72/B602L蛋白的阳性病毒株，能稳定高效表达CD2V/P72/B602L和sacas9SgRNA；

（4）通过对重组PRV进行蛋白免疫印迹法筛选出能够高效稳定表达CDV2/P72/ BL602蛋白的阳性克隆病毒株，该重组病毒被命名为重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株。

3.如权利要求1-2所述的一种预防非洲猪瘟的重组伪狂犬病病毒活疫苗，其特征在于所述的重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株，在SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No4所示的序列的氨基末端或羧基末端连接上选自如下组的标签：Poly-Arg、Poly-His、FLAG、Strep-tag II、c-myc以及各种loxp位点。