[发明专利]一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病病毒活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病活疫苗及其制备，本发明构建的非洲猪瘟病毒CD2V/P72/B602L基因和能敲除野生型P72基因的sacas9SgRNA序列重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株在BHK细胞株获得可以表达重组CD2V/P72/B602L蛋白抗原，其表达量稳定，同时经过体外细胞模拟实验表明该方法可以干扰病毒复制。以该重组株伪狂病病毒株作为生产毒株，经过悬浮微载体培养获得的表达表达重组CD2V/P72/B602L蛋白抗原制备成活疫苗，可以预防最近流行的非洲猪瘟病毒，还可以做成喷雾饮水形式疫苗减少注射应激反应。

技术领域

本发明涉及一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病病毒活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。

技术背景

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起猪的一种急性、烈性传染病。ASFV可感染家猪、野猪和蜱类，无明显的品种、性别和年龄差异，是唯一一种虫媒传播的DNA病毒。广泛分布的蜱类是重要的储存宿主和传播媒介。接触传播、经食物传播和软蜱吸血传播是本病的主要传播途径，病毒在野猪之间、野猪与家猪之间以及在家猪之间循环传播使得该病难以根除。该病病程短、死亡率高，家猪和欧洲野猪的病死率最高达100％，对养猪业危害巨大，造成巨大的经济损失和社会影响。世界动物卫生组织(OIE)将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。目前ASF缺乏有效的疫苗，预防要依靠严格的边境检疫、养殖场良好的生物安全措施以及野猪的跨境移动，而一旦暴发则需要采取紧急根除和净化以及区域化管理等措施以控制疫情恢复生产。非洲猪瘟原发于非洲，1957年蔓延至欧洲，随后又传到了加勒比和巴西^[3-5]。进入21世纪后，该病传播范围再次扩大，2007年传入东欧的格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯地区。在过去几年里该病又向西蔓延，进入乌克兰(2012)、白俄罗斯2013)、欧盟(立陶宛、波兰、拉脱维亚、爱沙尼亚，2014；希腊2020)以及摩尔多瓦(2016)。2018年8月我国沈阳发生了第一例ASF，此后全国蔓延(包括香港、台湾)。目前亚洲地区中韩国、菲律宾、越南、柬埔寨、印度尼西亚等国家均有疫情发生^[3-4]，2019年以来共有29个国家/地区报告了新的或正在流行的疫情。由于ASFV难以根除、病死率高、危害大、缺乏有效疫苗。

ASFV是双链DNA病毒，属于非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属，是该科中唯一一种病毒，通常认为只有一个血清型、24个基因型，对外界抵抗力较强。ASFV的潜伏期是4-19d，具体时间取决于病毒、宿主和感染方式。OIE《陆生动物卫生法典》规定的潜伏期是15d，作为进口隔离、疫点疫区封锁解禁的时间参考。感染猪可能在临床体征出现前2d已开始排毒，感染弱毒株的猪可能在感染70d后仍然持续排毒。ASF流行病学很复杂，受所处环境、猪的生产体系、有无媒介蜱存在、人类活动以及是否存在野猪等因素影响，在非洲、欧洲和亚洲发生的感染和流行模式也不同。ASFV虽然致死率高，但感染性并不像口蹄疫等烈性疫病那么强，可能会在猪群中缓慢传播。因此开发一种可以预防或阻断在猪群中疫苗或药物非常重要。