[发明专利]一种酶联免疫法检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供一种酶联免疫法检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其检测方法，试剂盒包括抗原包被的酶标板，酶标板为两个，其中一个包被S蛋白的RBD抗原；另一个包被S蛋白的NTD；两个酶标板分别用封闭液进行封闭。采用本发明的试剂盒对新型冠状病毒中和抗体进行检测，评价疫苗免疫效力。本发明提供的酶联免疫法检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，应用灵敏度高、特异性好、重复性好的酶联免疫法，通过将抗原固相化，利于洗涤去除非特异结合和分离未反应的物质，具有灵敏度高，特异性好的特点，适用于高通量样本的准确检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种酶联免疫法检测新型冠状病 毒中和抗体的试剂盒及其检测方法。

背景技术

根据冠状病毒基因组结构与系统发生学分析，冠状病毒科分为α、β、γ和δ 四个属，α和β属病毒可感染哺乳动物和人。SARS-CoV-2属于β属的新型冠状病 毒，圆形或椭圆形，直径60-140nm，电镜下呈皇冠样形状。

据报道，有研究团队从10个康复病人记忆B细胞和浆细胞中筛选出399 种单克隆抗体，经过人体体外环境的抗原抗体亲和力检测，以及新冠活病毒和 假病毒的中和实验，筛选出多种中和抗体。大部分中和抗体，如2M-10B11和 ACE2-fc以S蛋白的RBD为靶点，并阻断其与ACE2结合，表现出中和活性。 而4A8抗体对SARS-CoV-2表现出高中和效力，其结合的表位为S蛋白的NTD， 并不抑制S蛋白与ACE2结合。该抗体的轻链远离RBD，推测可能通过抑制S 蛋白的构象变化来中和SARS-CoV-2。因此新型冠状病毒中和抗体靶标包括针 对S蛋白的RBD和S蛋白的NTD。

疫苗是预防传染性疾病的有效方法之一，基于前期在SARS-CoV以及 MERS-CoV疫苗上的安全性以及有效性验证，新冠疫苗拓展了新的平台技术， 具体的开发策略包括了灭活及减活病毒疫苗、腺病毒载体疫苗、重组蛋白疫苗、 核酸疫苗和其他疫苗。据报道，全球在研的疫苗至少有142种，其中已有13 种候选疫苗进入了临床阶段，作为疫苗研制“第一梯队”，截止2020年6月24 日，我国已有6种疫苗进入临床研究，其中更是有三款疫苗即将进入临床Ⅲ期 试验。预防性疫苗成功与否的关键是其能否诱导有效的体液免疫，因此建立稳定、有效的疫苗评价系统，检测疫苗免疫反应的保护效果，对于疫苗的研制和 质控具有重要意义。

对于突发重大传染性疾病的预防，中和抗体治疗是有效预防和治疗的一个 重要策略。抗体制剂不但可用于流行区的高危易感染群的紧急被动免疫，而且 对于临床患者也具有较好的治疗作用。从临床免疫机制来看，大部分新型冠状 病毒肺炎患者康复后，机体内会产生针对SARS-CoV-2的特异性抗体，能够有 效清除病毒。在目前缺乏疫苗和特效药物的特殊情况下，采用特免血浆制品治 疗SARS-CoV-2感染是最为有效的方法之一，能够明显降低危重患者的病死率。

重型和危重型新型冠状病毒肺炎诊断和治疗专家共识建议：“将含有新型冠 状病毒抗体的人恢复期血浆用于病情进展较快、重型和危重型患者，可以作为 特异性治疗的一种选择。如使用恢复期血浆，应检测血浆中保护性抗体滴度水 平”。

目前的中和抗体检测主要在生物安全三级实验室内进行。利用活病毒细胞 培养的中和试验检测，对实验室等级要求高，严重限制了临床大规模的推广使 用。开发出可在生物安全二级实验室或普通实验室开展的快速中和抗体检测方 法，具有重要意义。

因此，中和抗体检测方法及试剂盒的开发，利于疫病流行病学调查、免疫 抗体监测以及疫苗免疫效力评价。

发明内容

由于新型冠状病毒感染后的康复人群的中和抗体评价及疫苗的免疫效力评 价均需要中和抗体的检测，目前利用活病毒细胞培养的中和试验检测，对实验 室等级要求高，严重限制了疫苗临床大规模的推广使用和特免血浆制品临床治 疗。为解决上述问题，本发明通过具有灵敏度高、特异性好、重复性好等特点 的酶联免疫法进行试剂盒的开发，建立了一种检测新型冠状病毒RBD中和抗体 和NTD中和抗体的酶联免疫试剂盒。