[发明专利]一种中华刺鳅和大刺鳅的分子鉴别方法

权利要求书

1.一种中华刺鳅和大刺鳅的分子鉴别方法，其特征在于：包含以下步骤，

(1)分别提取待鉴定的中华刺鳅和大刺鳅因组DNA；

(2)以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增中华刺鳅和大刺鳅的线粒体控制区，得到目的片段的PCR产物；

(3)扩增产物纯化后，直接测序，进行中华刺鳅和大刺鳅扩增产物序列比对，序列的第108、110和111位点碱基为C、C和T的是中华刺鳅，序列的第108、110和111位点碱基为T、T和C的则是大刺鳅；

所述的PCR扩增中华刺鳅和大刺鳅的线粒体控制区，其使用的上游引物如序列SEQ IDNO.1，下游引物如序列SEQ ID NO.2。

2.根据权利要求1所述的中华刺鳅和大刺鳅的分子鉴别方法，其特征在于：所述的PCR反应体系为50μL：50ng/μL的模板DNA 1μL，PCR缓冲液5μL，dNTP混合液4μL，每种dNTP0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2IU的Taq酶；双蒸水36μL；所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl 2 ，0.01％明胶组成；PCR扩增反应程序为：94℃预变性2min，94℃变性45s，58℃退火1min，72℃延伸1min，经30个循环后再72℃延伸10min。