[发明专利]一种卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的制备方法

说明书

本发明提供了卡贝缩宫素杂质Gly9‑OH的制备方法，采用固相合成和液相合成结合合成主链树酯。采用2‑CTC Resin，Boc‑Tyr(Me)‑OH,Fmoc‑Ile‑OH,Fmoc‑Gln(X)‑OH,Fmoc‑Asn(X)‑OH、Fmoc‑Cys((CH₂)₃COOtBu)‑OH、Fmoc‑Pro‑OH和Fmoc‑Leu‑OH作为起始原料参与合成树脂主链，通过裂解获得粗肽纯度高于95％。通过液相缩合接上H‑Gly‑OBzl得到带保护基的直链肽杂质，再脱掉Boc、Trt和tBu并关环得到环化中间肽，最后氢化脱苄基得到Gly9‑OH粗品，纯化后得到纯度大于99.5％的产品，收率大于60％。

技术领域

本发明涉及多肽合成技术领域，尤其是涉及一种卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的制备方法。

背景技术

卡贝缩宫素杂质Gly9-OH序列：Cyclo[CH₂CH₂CH₂CO-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys]-Pro-Leu-Gly-OH

分子结构式如下：

卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物，在工艺合成和存放过程中会产生杂质Gly9-OH,此杂质在生产研究中会一直使用，而此杂质的合成工艺不能沿用卡贝缩宫素工艺进行研究，因此开发一类合成此杂质的合成工艺，有利于该杂质的批量生产是非常必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的制备方法，本发明提供的制备方法收率和纯度高。

本发明提供了一种卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的制备方法，包括：

步骤1：固相合成Fmoc-Leu-树脂；

步骤2：根据卡贝缩宫素杂质Gly9-OH的肽序，在所述Fmoc-Leu-树脂上偶联氨基酸，得到Y-Tyr(Me)-OH-Ile-Gln(X)-Asn(X)-Cys((CH₂)₃COOtBu)-Leu-树脂；所述氨基酸选自Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys((CH₂)₃COOtBu)-OH、Y-Tyr(Me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Gln(X)-OH和Fmoc-Asn(X)-OH中的任一种或多种；

步骤3：将所述Y-Tyr(Me)-OH-Ile-Gln(X)-Asn(X)-Cys((CH₂)₃COOtBu)-Leu-树脂裂解，得到卡贝缩宫素杂质直链粗品Y-Tyr(Me)-Ile-Gln(X)-Asn(X)-Cys((CH₃)₃COOtBu)-Leu-OH；

步骤4：将卡贝缩宫素杂质直链粗品通过液相缩合偶联H-Gly-O(Z)，而后脱掉X、Y和tBu保护基得到H-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Leu-Gly-O(Z)；

步骤5：将所述H-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Leu-Gly-O(Z)液相环化得到环化中间肽Cyclo[CH₂CH₂CH₂CO-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys]-Pro-Leu-Gly-O(Z)；

步骤6：将Cyclo[CH₂CH₂CH₂CO-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys]-Pro-Leu-Gly-O(Z)脱掉保护基Z，纯化，得到卡贝缩宫素杂质Gly9-OH。