[发明专利]一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法及指纹图谱

权利要求书

1.一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，采收掌叶覆盆子药材和甜叶悬钩子；

步骤二，预处理：分别称取掌叶覆盆子果实和甜叶悬钩子果实各100 g，进行烘干10h处理，使其完全干燥，将烘干后的果实进行粉碎，并全部过四号筛，即得均一的两种样品粉末；

步骤三，有效成分的提取：

鞣化酸对照品溶液的配制：取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含5μg鞣花酸的溶液，即得；

分别准确称取两种果实粉末各2.0-4.0g置于两个三角烧瓶中，按料液比1:35加入70-80%甲醇，称定重量，超声处理20-40min，80-95℃回流1.5h，冷却至室温10-30℃，用70-80%甲醇补重后，过滤，精密量取10mL液体至蒸发皿中，蒸干后，用甲醇转移至5mL容量瓶中；

步骤四，HPLC指纹图谱的确定：

将步骤三获得的两种果实的提取物，分别用0.45μm微孔滤膜过滤后，制得待测溶液，得到两种果实的HPLC指纹图谱；

步骤五，图谱的处理：

用中药色谱指纹图谱相似度评价软件处理所得图谱；

所述步骤五，用中药色谱指纹图谱相似度评价软件处理所得图谱时，HPLC的色谱条件为：仪器：Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪；色谱柱：inertsil ODS-3 5μm，4.6×250mm；检测器：Agilent G7115A DAD检测器；流动相：0.4%甲酸：乙腈；柱温：25-35℃；流速：1.0mL/min；进样体积：10-20μL；

所述甜叶悬钩子流动相比例为：

指纹图谱运行0-25分钟，0.4%的甲酸水溶液从95%的比例下降到75.2%，同时乙腈的比例从5%升高到24.8%；

指纹图谱运行25-40分钟，0.4%的甲酸水溶液从75.2%的比例下降到70.9%，同时乙腈的比例从24.8%升高到29.1%；

指纹图谱运行40-57分钟，0.4%的甲酸水溶液从70.9%的比例下降到63.4%，同时乙腈的比例从29.1%升高到36.6%；

指纹图谱运行57-77分钟，0.4%的甲酸水溶液从63.4%的比例下降到53%，同时乙腈的比例从36.6%升高到47%；

指纹图谱运行77-90分钟，0.4%的甲酸水溶液从53%的比例下降到43.7%，同时乙腈的比例从47%升高到56.3%；

指纹图谱运行90-120分钟，0.4%的甲酸水溶液从43.7%的比例下降到36.6%，同时乙腈的比例从56.3%升高到63.4%；

指纹图谱运行120-150分钟，0.4%的甲酸水溶液从36.6%的比例下降到0%，同时乙腈的比例从63.4%升高到100%；

所述掌叶覆盆子流动相比例为：

指纹图谱运行0-8分钟，0.4%的甲酸水溶液从95%的比例下降到90.6%，同时乙腈的比例从5%升高到9.4%；

指纹图谱运行8-27分钟，0.4%的甲酸水溶液从90.6%的比例下降到83%，同时乙腈的比例从9.4%升高到17%；

指纹图谱运行27-55分钟，0.4%的甲酸水溶液从83%的比例下降到78.9%，同时乙腈的比例从17%升高到21.1%；

指纹图谱运行55-79分钟，0.4%的甲酸水溶液从78.9%的比例下降到53.3%，同时乙腈的比例从21.1%升高到46.7%；

指纹图谱运行79-86分钟，0.4%的甲酸水溶液从53.3%的比例下降到32.6%，同时乙腈的比例从46.7%升高到67.4%；

指纹图谱运行86-90分钟，0.4%的甲酸水溶液从32.6%的比例下降到0%，同时乙腈的比例从67.4%升高到100%；

所述区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的流动相比例为：

指纹图谱运行0-10分钟，0.4%的甲酸水溶液从95%的比例下降到89.5%，同时乙腈的比例从5%升高到10.5%；

指纹图谱运行10-25分钟，0.4%的甲酸水溶液从89.5%的比例下降到84.5%，同时乙腈的比例从10.5%升高到15.5%；

指纹图谱运行25-47分钟，0.4%的甲酸水溶液从84.5%的比例下降到76.3%，同时乙腈的比例从15.5%升高到23.7%；

指纹图谱运行47-60分钟，0.4%的甲酸水溶液从76.3%的比例下降到35%，同时乙腈的比例从23.7%升高到65%；

指纹图谱运行60-75分钟，0.4%的甲酸水溶液从35%的比例下降到15.8%，同时乙腈的比例从65%升高到84.2%。