[发明专利]一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法及指纹图谱

说明书

本发明涉及一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法及指纹图谱，通过该方法能够将果实外形一致的同科同属的近缘物质区分开。指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：步骤一，采收掌叶覆盆子药材和甜叶悬钩子；步骤二，预处理：分别称取掌叶覆盆子果实和甜叶悬钩子果实各100~300 g，进行烘干10h处理，使其完全干燥，将烘干后的果实进行粉碎，并全部过四号筛，即得均一的两种样品粉末；步骤三，有效成分的提取；步骤四，HPLC指纹图谱的确定；步骤五，图谱的处理。该方法可以准确的区分掌叶覆盆子药材与甜叶悬钩子两个品种，具有方法简便、精密度高、重现性好等优点。

技术领域

本发明属于药材指纹图谱技术领域，具体涉及一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法及指纹图谱，通过该方法能够将果实外形一致的同科同属的近缘物质区分开。

背景技术

华东掌叶覆盆子Rubus chingii Hu为蔷薇科悬钩子属植物，果实和叶中含有丰富的营养物质，未成熟果实和根均可入药，主要分布于浙江、江苏、安徽、江西和福建等华东地区。华东掌叶覆盆子未成熟果实为常用中药覆盆子，被2015、2020版中国药典收入，具有益肾固精缩尿、养肝明目的功效，主要适用于遗精滑精，遗尿尿频阳痿早泄，目昏眼花等。

甜叶悬钩子Rubus suavissimus S.Lee是蔷薇科悬钩子属的一个新种，主要利用其叶制备成甜叶凉茶。2015、2020版中国药典均未对其进行收入，本品和掌叶覆盆子近缘，花较大，直径3-5厘米，花萼裂片较长，长7-10毫米，花瓣较大，长1.5-2.5厘米；叶5或7深裂，少见6裂或8裂，裂片披针形或椭圆形。甜茶提取物具有抗过敏、预防高脂性血症、降血糖等作用。

两者虽然使用部位不同，但甜叶悬钩子果实与华东掌叶覆盆子果实均属于聚合果类型，外形大小颜色一致，肉眼、显微等均难易区分，且从有效成分来说，甜叶悬钩子中同样能够检测到中国药典规定的掌叶覆盆子鞣花酸与山柰酚-3-O-芸香糖苷两个指标成分，而甜叶悬钩子除叶子以外，果实的产量甚至比掌叶覆盆子高，其杆无刺，易于采收；甜叶悬钩子中鞣花酸与山柰酚-3-O-芸香糖苷含量低，不能达到中国药典标准，两者在原植株的性状差异较大，而新鲜及干燥后的果实难以区分，许多农户将甜叶悬钩子果实混杂于优质掌叶覆盆子中，将其作为中药材出售，这对于中药材优质种源的发展势必会带来影响，也会给纯种覆盆子中药材品种的延续带来冲击。

发明内容

本发明主要针对上述技术问题，发明了一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法及指纹图谱，该方法可以准确的区分掌叶覆盆子药材与甜叶悬钩子两个品种，具有方法简便、精密度高、重现性好等优点；该方法能直观的区分掌叶覆盆子药材与甜叶悬钩子多种成分的差异，有助于阐明掌叶覆盆子作为药用的机理及优势，且本发明的方法检测到的指纹图谱化学成分相对较多、峰形、柱效等均较优。

本发明的上述技术问题是通过以下技术方案得以实施的：一种区分掌叶覆盆子与甜叶悬钩子的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，采收掌叶覆盆子药材和甜叶悬钩子；

步骤二，预处理：分别称取掌叶覆盆子果实和甜叶悬钩子果实各100g，进行烘干10h处理，使其完全干燥，将烘干后的果实进行粉碎，并全部过四号筛，即得均一的两种样品粉末；

步骤三，有效成分的提取：

鞣化酸对照品溶液的配制：根据中国药典2015版一部，取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含5μg鞣化酸的溶液，即得；