[发明专利]一种联合检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒野毒株的引物和探针、试剂盒及应用

说明书

本发明提供一种联合检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒野毒株的引物和探针、试剂盒及应用，引物和探针包括：检测非洲猪瘟病毒的正向引物，其序列如SEQ ID NO:1所示；检测非洲猪瘟病毒的反向引物，其序列如SEQ ID NO:2所示；检测非洲猪瘟病毒的TaqMan探针，其序列如SEQ ID NO:3所示；检测猪伪狂犬病病毒野毒株的正向引物，其序列如SEQ ID NO:4所示，检测猪伪狂犬病病毒野毒株的反向引物，其序列如SEQ ID NO:5所示，检测检测猪伪狂犬病病毒野毒株的TaqMan探针，其序列如SEQ ID NO:6所示。本发明的联合检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒野毒株的引物和探针、试剂盒及应用，可同时检测非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒野毒株的单一或混合感染，提高种猪场ASF和PR监测和诊断效率。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种联合检测非洲猪瘟病毒和 猪伪狂犬病病毒野毒株的引物和探针、试剂盒及应用。

背景技术

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fevervirus，ASFV）引起的一种急性、高度接触性传染病。ASF 临床症状表现为发热、呼吸困难、皮肤发绀和淋巴结、肾、胃肠黏膜明显出血，死亡率高达100%。由于该病对养猪业危害巨大，且病原学和流行病学较为复杂，尚无有效疫苗用于临床，故世界动物卫生组织（OIE）将非洲猪瘟列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。尤其是自2018年9月我国发生首例非洲猪瘟疫情以来，给我国生猪养殖造成非常严重的损失，甚至严重影响百姓的“菜篮子”，给我国经济和民生保障带来巨大影响。因此，相关部门相继出台相应的非洲猪瘟防控措施，尤其是种猪要严格规范种猪引种和调运，对跨省调运种猪必须严格开展ASFV检测。

伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种家畜和多种野生动物 共患的高度接触性传染病，能够造成发热、奇痒、繁殖障碍、脑脊髓炎等症状。 PRV能感染反刍动物、啮齿动物、食肉动物等，但猪是PRV唯一的传播和贮存 宿主，可以隐性感染，长期带毒。PRV可感染各个阶段的猪，且临床症状因日 龄而不同。尤其是PRV感染可造成种猪带毒并垂直传播，因此种猪一旦带毒便 可终身带毒、排毒，污染环境，引起仔猪的感染和发病。同时，由于PRV容易 发生缺失/插入变异，使得现有疫苗无法对猪群产生有效保护，加上目前生猪养 殖过程中PRV疫苗仍以活疫苗为主，存在毒力返强风险，所以PRV在我国猪群 长期广泛流行难以控制，给我国养猪业造成巨大损失。因此《国家中长期动物疫 病防治规划(2012-2020)》将PR列为净化种畜禽重点疫病。

为实现种猪场ASF和PR的大规模筛查和监测，急需一种快速有效的 ASFV和PRV检测方法。常规的分子诊断包括普通PCR，荧光定量PCR、基因 芯片及恒温扩增检测技术等，普通PCR、基因芯片及恒温扩增检测技术等方法 存在灵敏度低、成本高，开发技术难度大、易造成气溶胶污染等缺点，而荧光定 量PCR比其他常规分子诊断技术具有灵敏性高、特异性好、通量高、污染低等 优势。其中，实时TaqMan荧光定量PCR技术在动物疫病诊断、基因定性和定 量检测等方面得到广泛应用，并且已经成为当前病毒核酸快速检测的主要方法。 目前，针对ASFV或PRV的实时荧光定量PCR检测试剂盒类型比较单一，单纯 检测ASFV和PRV野毒或疫苗毒，无法实现ASFV和PRV的双重检测，这些试 剂盒费时费力且成本相对较高，难以应对当前猪场病毒混合感染的现状。

因此，研发一种联合检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒的双重实时荧 光定量PCR试剂盒，有助于提高种猪场ASF和PR监测和诊断效率，确保种猪 场生物安全。

发明内容

本本发明解决的技术问题是提供一种联合检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬 病病毒野毒株的引物和探针、试剂盒及应用，同时检测非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬 病病毒野毒株的单一或混合感染，提高种猪场ASF和PR监测和诊断效率。

为了解决上述问题，本发明的一个方面提供一种联合检测非洲猪瘟病毒 和猪伪狂犬病病毒野毒株的引物和探针，包括：