[发明专利]一种小胶质细胞的培养方法

权利要求书

1.一种小胶质细胞的培养方法，其特征在于，包括：

将组织移入装有预冷HBSS的15ml的离心管中，1000rpm离心3min；

弃去上层清液，加入预热的含白血病抑制因子的0.25％胰酶，轻微摇晃使组织与消化液充分接触，得到组织溶液；

在含10％胎牛血清的DMEM培养基中添加终浓度为10μg/L的白血病抑制因子；

在组织溶液中加入等体积的已加入白血病抑制因子的DMEM培养基终止消化，1000rpm离心3min；

加入10ml已加入白血病抑制因子的DMEM培养基，用枪尖反复吹打使细胞分散，75μm滤网过滤，得到单细胞悬液；

将单细胞悬液接种于若干个25cm²细胞培养瓶中进行培养。

2.如权利要求1所述的小胶质细胞的培养方法，其特征在于，轻微摇晃使组织与消化液充分接触，具体包括：

37℃消化20-30min，15min摇晃一次。

3.如权利要求2所述的小胶质细胞的培养方法，其特征在于，在组织溶液中加入等体积的已加入白血病抑制因子的DMEM培养基终止消化，1000rpm离心3min之后，所述方法还包括：

用1ml移液枪吸去上层清液及絮状物。

4.如权利要求3所述的小胶质细胞的培养方法，其特征在于，75μm滤网过滤之前，所述方法还包括：

将滤网用10ml已加入白血病抑制因子的DMEM培养基清洗一次。

5.如权利要求1所述的小胶质细胞的培养方法，其特征在于，将单细胞悬液接种于若干个25cm²细胞培养瓶中进行培养，包括：

将培养瓶置于37℃、5%CO₂培养箱培养24h后更换一次培养基，以后每3d换一次液，并在镜下观察细胞的生长和存活情况。

6.如权利要求1所述的小胶质细胞的培养方法，其特征在于，将单细胞悬液接种于若干个25cm²细胞培养瓶中进行培养之后，所述方法还包括：

采用摇床震荡法分离小胶质细胞。