[发明专利]一种动物原代干细胞除菌培养液的制备方法有效
| 申请号： | 202010959879.8 | 申请日： | 2020-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN112080461B | 公开（公告）日： | 2022-03-22 |
| 发明（设计）人： | 王凤武;李军燕;李晓奇;罗晓平;张琼琳;孙杰;闫红霞;侯勇跃 | 申请（专利权）人： | 内蒙古自治区农牧业科学院 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 陈炳萍 |
| 地址： | 010020 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 动物 干细胞 培养液 制备 方法 | ||
1.一种绵羊胎儿组织中干细胞的原代培养方法，其特征在于，所述绵羊胎儿组织中干细胞的原代培养方法，包括：
无菌条件下，取孕中期绵羊胎儿，剪切相应组织于培养液II中静置30min；
采用组织机械分离方法分离，用培养液I于37 ℃ 5% CO2 饱和湿度条件下培养绵羊胎儿组织原代细胞48h～96h；
细胞克隆出现后用D-PBS洗，挑取状态较好的细胞克隆用培养液III培养，培养冻存备用；
所述培养液I： 1% L-谷氨酰胺、1% 非必需氨基酸、1%丙酮酸钠、微量β-巯基乙醇、500u/mL LIF、5 ng /mL bFGF、15% FBS、青霉素200U、链霉素200U、卡那霉素100μg、制霉菌素 15μg、两性霉素B5μg ，DMEM低糖定容至100 mL，用0.22 μL 的滤器过滤，4 ℃保存；
所述培养液II：青霉素200U、链霉素200U、卡那霉素100μg、制霉菌素 15μg、两性霉素B5μg，D-PBS定容至100 mL，4 ℃保存；
所述培养液III：1% L-谷氨酰胺、1% 非必需氨基酸、1%丙酮酸钠、微量β-巯基乙醇、500u/mL LIF、5 ng /mL bFGF+15% FBS，DMEM低糖定容至100 mL，用0.22μL的滤器过滤，4℃保存。
2.如权利要求1所述绵羊胎儿组织中干细胞的原代培养方法，其特征在于，细胞克隆出现后用D-PBS洗3遍，挑取状态较好的细胞克隆用培养液III培养，培养至3～4代冻存备用。
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