[发明专利]靶核酸的检查方法及检查装置

说明书

本发明提供一种即使以微量的被检体也能同时迅速地检测多种病原体的检测方法及用于执行该方法的试剂盒，通过采用简便的检测工序，避免病原体的检测操作中的人为错误，从而能降低假阴性的概率。靶核酸的检查方法包括：(1)将包含靶核酸的被检体与阳性对照核酸混合得到被检体与阳性对照核酸的被检体混合物；(2)将被检体混合物与包含表面活性剂的PCR缓冲液混合得到缓冲液混合物；(3)将缓冲液混合物的一部分添加至包含DNA聚合酶、阳性对照核酸及PCR反应对照核酸的PCR对照用固体组合物；(4)将缓冲液混合物的一部分添加至包含DNA聚合酶及1种或2种以上的PCR引物对的PCR反应用固体组合物；(5)检测(3)及(4)的结果所生成的PCR产物。

技术领域

本发明涉及从包含作为目标的核酸(以下有时称为靶核酸)的被检体中检测靶核酸的方法及用于执行该方法的试剂盒。更详细地说，涉及将阳性对照核酸混合至包含靶核酸的被检体用容器内并检测被检体中的靶核酸的方法及用于该方法的试剂盒。

背景技术

在感染症的诊断、农作物的核酸检查、基因诊断等各种领域中广泛利用涉及核酸的扩增及检测的技术。使用了各种各样的方法作为进行核酸的扩增或检测的方法。

作为核酸的扩增法，除了有代表性的利用聚合酶链反应(以下有时称为PCR)的PCR法之外，还已知有转录-反转录协同反应(以下有时称为TRC)法、转录介导扩增(以下有时称为TMA)法、依赖核酸序列的扩增(以下有时称为NASBA)法、环介导等温扩增(以下有时称为LAMP)法、SMART扩增工艺(以下有时称为MAP)法、等温嵌合引物启动核酸扩增(以下有时称为ICAN)法等。

例如，作为使用PCR法的对感染症的诊断，可以例举对葡萄膜炎的诊断。葡萄膜炎是在眼内发生炎症的疾病的总称，在重症例中，有较高概率引发失明等视觉障碍。葡萄膜炎被分为非感染性葡萄膜炎与由病原体引起的感染性葡萄膜炎。利用免疫抑制剂对非感染性葡萄膜炎进行药物治疗，但对于感染性葡萄膜炎，需要利用与作为感染原因的病原体相对应的药剂进行治疗。

但是，有时仅凭临床表现对感染性葡萄膜炎与非感染性葡萄膜炎进行辨别较为困难，存在因诊断的延迟或不适当的治疗而使症状加重的病例。因此，为了选择合适的治疗方法及防止症状加重，尽早地进行对葡萄膜炎中的病原体的存在及病原体的鉴定至关重要。

作为成为感染性葡萄膜炎的原因的病原体，可以例举病毒、细菌、真菌、原虫等，其中以病毒为原因的感染性葡萄膜炎的发病频率最高。作为成为原因的病毒，可以例举单纯疱疹病毒(HSV)1型及2型、水痘带状疱疹病毒(VZV)、巨细胞病毒(CMV)等疱疹病毒、以及人类T细胞白血病病毒(HTLV-1)等。在进行感染性葡萄膜炎的诊断或治疗时，感染体的鉴定为重要的信息。因此，为了鉴定眼内局部中的感染病毒，需要将从前房采集的前房水或从眼内采集的玻璃体等作为被检体使用。

前房是位于角膜与晶状体之间的空间，为了对病原体进行鉴定，将充满该空间的前房水作为被检体，进行基于PCR的基因检查。但是，前房水的采集量通常为100μL以下，有时被检体量不够检测多种病原体。

进而，在感染性葡萄膜炎中，成为原因的病原体主要可以例举如下9个种类：单纯疱疹病毒1型(HSV-1)及2型(HSV-2)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(EBV)、人类疱疹病毒6型(HHV-6)、巨细胞病毒(CMV)、人类T细胞白血病病毒(HTLV-1)、作为细菌的梅毒螺旋体、以及作为原虫的弓形虫。

为了单独地对这些病原体进行检测，需要对每个病原体分别制备PCR试剂及PCR引物等，但是若检测对象的数量变多，则发生试剂的放入错误等人为错误的可能性变高，还存在给出错误的检测结果的危险。

除了人为错误之外，还存在由于以前进行的核酸扩增反应的扩增产物混入新进行的核酸扩增反应的容器内(污染)，从而产生假阳性等的情况。作为防止这种污染的方法，公开有dUTP/UDG污染去除法(非专利文献1)、对dUTP/UDG污染去除法进行改良而得的方法(专利文献1)。